ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Ныбор камер из "Сверхслабые излучения в межклеточных взаимодействиях" Кроме того, пас интересовала возможность получепия зеркального цитопатического действия без помещения камер во вращающийся барабан. Было исследовано несколько типов камер, в которых эффективное выращивание культуры не требовало вращения. [c.26] Первая конструкция (фото 3) — камера шарообразная с отведенным сбоку около дна патрубком, к которому припаивалась подлогкка. Б камеру вносили 5 мл питательной среды со взвесью клеток (200—300 тыс. на 1 мл среды). Такая камера не помещалась в барабан для вращения. Над питательной средой оставался слой воздуха. Б таких условиях клетки давали хоротий рост на подложке, но зеркальный цитопатический эффект отсутствовал даже при контактировании в течение 3—4 сут при наличии в культуре ткани, парной камеры, пораженной вирусом или сулемой выраженного цитопатического эффекта (на 4-(-). [c.26] Вторая конструкция — камеры в виде чашек Карреля, наложенных одна на другую, с впаянным кварцевым или стеклянным дном (фото 4). Камеры не вращались. Исследовано 50 пар камер, из них 40 с кварцевым и 10 пар с простым стеклом. Ни в одном случае зеркальный цитопатический эффект не наблюдался. [c.26] В качестве вращающегося барабана нами использован аппарат для культивирования тканей во вращающихся пробирках. Мотор аппарата был выпесеп из термостата, в нем находился лить барабан с укрепленными на нем камерами. На барабан помещалось одновременно до 56 пар камер. [c.26] Таким образом, оптимальным условием культивирования клеток вне организма и воспроизведения зеркального ЦПЭ было вращение камер в барабане со скоростью 24—25 об/ч. При такой скорости вращения клетки в колбах равномерно смываются средой без гидродинамического воздействия, не подсыхают, на достаточное время соприкасаются с газовой фазой среды культивации, своевременно смываются с поверхности монослоя продукты метаболизма, тормозящие рост и деление клеток. Все эти моменты отражены в известных руководствах по культивированию клеток вне организма. [c.27] Культивировали клетки па среде 199 Паркера с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков. [c.28] Проведена серия экспериментов но влиянию толщпны и качества подложки, на которой выращивался монослой тканевой культуры, на условия получения зеркального ЦПД. [c.28] Примечание. В числителе — число положительных опытов, в знаменателе число отрицательных опытов. [c.28] Таким образом, толщина кварцевой или слюдяпой подложки от 0,2 до 0,6 мм позволила получить зеркальный ЦПЭ в интактной культуре в парных камерах. При толщине подложки 1,0 мм (для пары камер 2,0 мм) зеркальный ЦПЭ исчезал. При исполь-зоваиии стеклянных подложек любой толщины оп не проявлялся (см. табл. 2). [c.29] Для определения минимальной эффективной экспозиции коп-тактирования зараженных и незараженных клеточных культур в парных камерах, необходимой для проявления зеркального ЦПД, стыкованные камеры с пораженной и непораженной клеточной культурой разъединяли через определенные промежутки времени (2, 4, 6, 12, 24, 48 ч) с дальнейшим наблюдением за морфологическими характеристиками культуры ткапи в зеркальных камерах. [c.29] Исследовано по 50 пар камер каждой экспозиции при воздействии различных экстремальных агентов. Эксперимент проводился одновременно с двумя парами камер, время экспозиции которых было одинаково, так же как и все прочие условия. [c.29] Вторую пару демонтировали после окончания онтнмальпого времени экспозиции (48 ч). Подложки фиксировали, красили гематоксилин-эозином для морфологического исследования. Культуральную жидкость отбирали для выявления вируса при пассаже на культуре ткапи как из зараженной, так и зеркальпой камеры. При контакте камер в течение 48 ч зеркальный 11,110 проявлялся в 35—-40 нарах камер из 50. [c.30] Учет цитопатического эффекта вели по отношению числа погибших клеток к числу всех клеток и но тину морфологических изменений. Слабоположительный цитопатический эффект оценивали отношением 1 10, средний — 1 2, выраженный — 2 3-1 1. [c.31] В качестве экстремальных агентов использовались вирус Коксаки А-13, вирус классической чумы птиц РРУ), двухлористая ртуть (сулема), ультрафиолетовая радиация. [c.32] После того, как па дне камер образовался монослой, камеры с внесенным повреждающим агентом монтировались попарно с интактными доньями-подложками и закреплялись на вращающемся барабане перпендикулярно оси. Барабан находился внутри затемненного термостата Ь = 37°С) и вращался вместе с камерами со скоростью 25 об/ч. Таким образом, клетки в обеих камерах равномерно омывались питательной средой, не подсыхали и не голодали. Контроль на выявление спонтанной дегенерации клеток культуры ткапи постоянно сопровождал все опыты. Снонтап-цая дегенерация не наблюдалась. [c.32] Вернуться к основной статье