ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Факторы, влияющие на хранение нуклеиновых кислот из "Подготовка биологического материала лдя молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел" Соединения, содержащие в своем составе ионы металлов переменной валентности (например, ионы железа (II), железа (III), меди (II)), являются потенциальными центрами радикало-образования, и способствуют разрушению нуклеиновых кислот. [c.59] При аутоокислении липидов, вследствии образования пероксильных радикалов, ускоряется образование 8-гидроксигуанина, что может существенно сказаться на результатах сиквенс-анализа ДНК. [c.60] УФ-лучи. Облучение светом с длиной волны 260 нм вызывает различные повреждения, в том числе приводит к образованию тиминовых димеров и поперечных сшивок. Облучение светом с длиной волны 320 нм также вызывает образование поперечных сшивок, но с меньшей эффективностью. [c.60] Диэтилпирокарбонат и диэтилоксидифор-мат. Эти соединения могут вызывать потерю биологической активности нуклеиновых кислот. С двухцепочечными нуклеиновыми кислотами они, как правило, не реагируют при комнатной температуре. [c.60] Низкие значения pH вызывают депуриниза-цию (этот процесс характеризуется высокой энергией активации). [c.60] Бромистый этидий вызывает фотоокисление ДНК при облучении ее видимым светом в при-сугствии молекулярного кислорода. Он хорошо захватывает свободные радикалы. [c.60] Продукты его окисления могут вызывать разрывы фосфодиэфирных связей. [c.60] Перекиси вызывают, по-видимому, разрывы фосфодиэфирных связей. [c.60] Формамид. Большинство водных растворов формамида со временем закисляется (до pH 5). Поскольку процесс катализируется щелочью, то лучше забуферить раствор формамида около pH 7 с помощью фосфата. Если РНК находится в формамиде дольше нескольких дней, то в ней обнаруживается некоторое количество разрывов фосфодиэфирных связей. [c.61] Этанол. В отсутствие тяжелых металлов этанол не вызывает повреждений ДНК. [c.61] Нуклеазы. У людей на кожном покрове присутствуют нуклеазы. Поэтому старайтесь, чтобы пальцы не приходили в прямой или опосредованный контакт с нуклеиновыми кислотами. В большинстве своем ДНК-азы по сравнению с РНКазами менее устойчивы. [c.61] Хранить ДНК в течение длительного времени лучше всего в растворах с высокой концентрацией соли ( 1 М), высокой концентрацией Ыа2-ЭДТА ( 10 мМ) при pH 8,5 (трис-буфер). Очень хорошо хранить ДНК в растворе СзС с бромистым этидием, плотность которого соответствует плавучей плотности ДНК, при 5°С в темноте (завернув сосуд в алюминиевую фольгу). При этих условиях за год происходит разрыв примерно одной фосфодиэфирной связи на 200 тыс. н.п. ДНК. [c.62] Очень удобно хранить биологический образец, содержащий ДНК (как правило, кровь), на РТА-картах. Временные исследования с использованием РТА-карточек начались с 1989 года. Полученные результаты показывают, что амплификация ДНК, иммобилизованной на необработанных карточках, может оказаться неудачной уже 3 течение первых 6 мес. хранения. Успешная амплификация ДНК, иммобилизованной на карточках, обработанных РТА, была осуществлена и после более чем 6-летнего хранения (табл. 3). [c.62] Вернуться к основной статье