ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Концентрирование и очистка экстрактов ДНК при помощи устройства из "Подготовка биологического материала лдя молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел" Цельная кровь, пятна крови, волосы, мягкие ткани, клетки букального эпителия. [c.165] В микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл добавить 1 мл деионизованной воды и 0,5 мл крови, перемешать. Инкубировать при комнатной температуре. [c.165] Центрифугировать при 10000 об/мин. [c.165] Осторожно удалить супернатант. Осадок лейкоцитов дважды промыть 1 мл деионизованной водой. [c.165] Добавить 1 мл лизирующего буфера и инкубировать на ДОДЕ-КАТОРЕ (мощный вортекс). [c.166] Осторожно удалить супернатант Осадок лейкоцитов дважды промыть 1 мл деионизованной водой. Добавить 1 мл лизирующего буфера и инкубировать на ДОДЕ-КАТОРЕ (мощный вортекс). [c.166] Перенести носитель с пятном крови в пробирку на 1,5 мл. Добавить 1 мл лизирующего буфера и инкубировать на ДОДЕ-КАТОРЕ (мощный вортекс). [c.166] Центрифугировать при 10000 об/мин. [c.167] Перенести примерно 0,5-20 мг свежей или замороженной мягкой ткани в 1,5 мл реакционную пробирку. [c.167] Соединительные ткани должны быть предварительно измельчены с помощью жидкого азота. Добавить 1 мл лизирующего буфера и инкубировать на термошейкере при 50°С. [c.167] ВНИМАНИЕ отбирать супернатант следует осторожно, не задевая осадка сорбента 1пУ15огЬ 50 . [c.168] Концентрирование с помощью entri on 100 рекомендуется проводить для образцов, содержащих меньше, чем 500 нг ДНК (например, в случае выделения из 10 мкл крови). Концентрирование образцов с большим содержанием ДНК можно проводить этанолъной преципитацией. [c.169] Водный раствор ДНК без примесей фенола, хлороформа и бутанола, способных повредить мембрану entri on 100. [c.169] Нельзя центрифугировать со скоростью более 1000 д, во избежание повреждения мембраны entri on 100 . Время центрифугирования подбирают опытным путем так, чтобы ДНК сконцентрировалась в объеме 4-6 мкл, обычно не более 30 минут, при комнатной температуре. После центрифугирования содержимое нижнего резервуара удаляют. [c.171] Рисунок 17. Получение концентрированного раствора ДНК. [c.171] Вернуться к основной статье