ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Спектрофотометрическая детекция нуклеиновых кислот из "Подготовка биологического материала лдя молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел" Концентрацию нуклеиновых кислот в растворе можно рассчитать, измерив его оптическую плотность при 260 нм. Одна единица оптической плотности примерно соответствует концентрации двухцепочечной ДНК 50 мкг/мл и концентрации одноцепочечной ДНК и РНК 40 мкг/мл. По оптической плотности растворов при 260 нм не возможно судить о наличии одно — или двухцепочечных форм нуклеиновых кислот, а также о белковых загрязнениях. Для оценки степени очистки образцов ДНК от белковых примесей можно использовать отношение между оптической плотностью при 260 и 280 нм. Для чистых препаратов ДНК и РНК оно должно быть равно соответственно 1,8 и 2. Если это отношение меньше, значит, препараты загрязнены белками или фенолом, и оценка концентрации будет неверна. В этом случае необходимо повторить обработку протеиназой К и экстракцию фенолом/хлороформом. Поглощение при 325 нм указывает на наличие в растворе частичек пыли (грязи) или на грязную кювету. Примеси ве-ш,еств с пептидными связями или с ароматическим ядром, такие, как протеины и фенол, будут поглощать при 230 нм. [c.179] Ниже представлена методика спектрофотометрического определения ДНК применительно к однолучевым приборам. [c.180] Для одноцепочечной ДНК это соотношение рассчитано для 1 см кювет и нейтральных значений pH. Все эти вычисления основаны на законе Бугера-Ламберта-Бера А = еС1, где А — оптическая плотность, С — концентрация ДНК, 1 — толщина кюветы (обычно 1 см), 8 — моляр-ный коэффициент экстинции. Если концентрация выражена в моль/литр (толщина кюветы равна 1 см), коэффициент молярной экстинции имеет размерность М см . В случае же, если концентрация выражается в мкг/мл, е имеет размерность (мкг/мл) см Ч В нашем случае значения в следующие для одноцепочечной ДНК 0,027 (мкг/мл) СМ для двухцепочечной ДНК 0,020 (мкг/мл)СМ 1. Используя приведенные выше формулы, получаем, что одна единица оптической плотности при X = 260 нм соответствует 50 мкг/мл двухцепочечной ДНК и приблизительно 37 мкг/мл одноцепочечной ДНК. [c.181] Типичные значения для четырех длин волн для высокоочищенной ДНК приведены в таблице 7. [c.182] Спектрофотометрические показатели препарата высокоочищенной ДНК тимуса теленка, растворенной в 1хТЫЕ буфере в концентрации 25 мкг/мл. [c.182] Вернуться к основной статье