ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Источники и способы сохранения микроорганизмов из "Типовые реакции ферментативной химии" Питание и среда для каждого организма специфичны. В состав питания и среды должны входить источники углерода и азота, а также минеральные соли в количествах, способствующих хорошему росту необходимы также и витамины. Источниками углерода и азота часто служат гидролизаты белков или мясные экстракты. Потребность в витаминах может быть удовлетворена экстрактами дрожжей или печени. Минеральные вещества обычно добавляются в виде неорганических солей, хотя малых количеств их, находящихся в водопроводной воде, достаточно для многих микроорганизмов. Если требуется дополнительное количество углеводов как источника углерода и энергии, то обычно используют глюкозу или сахарозу. Компоненты среды растворяют в воде и разбавляют затем раствор до необходимого объема. Жидкую питательную среду, применяемую для выращивания посевного материала, наливают в пробирки или колбы, которые закрывают пробками и стерилизуют затем Б автоклаве при 120° (1 ати) в течение 10—15 мин [10]. [c.11] Если требуется плотная среда, то до стерилизации добавляют агар. Когда для роста микроорганизма необходимы аэробные условия, то создают наклонную поверхность питательной среды, давая возможность агару застыть в пробирке, находящейся под углом приблизительно 25—30°. Затем косой агар засевают, распределяя на его поверхности живые клетки микроорганизмов, находящиеся в стерилизованной петле для посевов. В случае же выращивания на плотной среде анаэробного организма агару дают застыть в пробирке, расположенной вертикально, после чего засевают среду, погружая в агар петлю для посевов, содержащую клетки требуемого микроорганизма. Можно выращивать анаэробы и на жидких средах. [c.12] Пробирки с посевным материалом на агаре или жидкой среде инкубируют при температуре, наиболее пригодной для оптимального развития клеток (обычно при 25—30°, хотя некоторым бактериям требуется 45°). После того как культуры достигнут удовлетворительного роста на агаре, их можно сохранять в холодильном шкафу. Некоторые бактерии можно сохранять в холодильном шкафу и в жидкой среде, в которой их выращивали. Спорообразуюш,ие бактерии сохраняются неограниченно долго, если суспензию клеток спор вылить на стерильную почву и затем высушить в вакууме при 45°. Почвенные культуры стрептомицетов и плесеней приготовляют аналогичным путем, за исключением того, что взвесь клеток до прибавления к стерильной почве инкубируют в течение двух дней и затем сушат при комнатной температуре. [c.12] Широко распространенным приемом, позволяющим сохранять многие бактерии, дрожжи и плесени в течение длительного времени, является лио-фильная сушка [8]. В этом случае микробшзю клетки суспендируют в небольшом объеме стерильной жидкости, например в бычьей сыворотке, снятом молоке, растворах пептона или лактозы. Затем суспензию помещают в небольшую ампулу и высушивают в замороженном состоянии в высоком вакууме, после чего ампулу запаивают в вакууме. Клетки, обработанные таким образом, остаются жизнеспособными на многие годы. Другой, менее употребительный способ сохранения клеток в жизнеспособном состоянии состоит в том, что клетки покрывают слоем стерильного минерального масла толнщной 1 см. Этот прием хорошо оправдывает себя при хранении дрожжей. [c.12] Различные штаммы одного и того же рода и вида отличаются по своей способности осуществлять то или иное биохимическое превращение. Их называют природными вариантами. Рентгеновское или ультрафиолетовое облучение может иногда вызвать генетические изменения, ведущие к образованию микроорганизмов, обладающих новыми, ранее не известными синтетическими возможностями. Такие соединения, как колхицин и азотистые аналоги иприта, также являются мутагенными агентами. Измененные ормы называются мутантами. Существуют и другие подходы к решению вопросов генетики, например гибридизация дрожжей. [c.12] Как уже подчеркивалось, чистота культуры имеет большое значение. Необходимо избегать заражений. Ватные пробки отравляют, чтобы не допустить роста посторонних бактерий и плесеней. При пересевах спор пылевидного характера нужно соблюдать предосторожности, чтобы исключить попадание загрязненных аэрозолей. Постоянное внимательное отношение к такого рода деталям и образцовая чистота лаборатории служат залогом успешной работы по ферментации. [c.12] Вернуться к основной статье