ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Аналитический электрофорез в агаровом (агарозном) геле из "Электрофорез в разделении биологических макромолекул" Очистка агара. Агар можно очистить, промывая гель дистиллированной водой [461]. [c.57] Электроосмос в обработанном щелочью и восстановленном агаре почти отсутствует. [c.59] Аппарат для электрофореза состоит из двух кювет высотой 6 ом и шириной 7 ом, служаш,их электродными сосудами. Их длина подбирается соответственно числу одновременно используемых пластинок, В каждой кювете по всей ее длине проходит платиновая проволока. Сосуды заполняют буфером для электрофореза, наливая его до уровня верхнего сливного отверстия. Рекомендуется обеспечить циркуляцию буфера, чтобы избежать изменений его pH при проведении опыта, В буфер опускают полоски бумаги, покрытые слоем геля. [c.61] В оригинальной статье Грабара и Уильямса [461] указано, что разделенные при электрофорезе белки подвергали иммунодиффузии, чтобы охарактеризовать компоненты по их антигенным свойствам (иммуноэлектрофорез, см. гл. П.4). [c.61] Бирд и Джексон [121] несколько модифицировали описанный метод и предложили использовать в качестве подложки не стеклянные пластинки, а рентгеновскую пленку, что позволило избежать образования трещин в геле. Разделение они проводили в камере для бумажного электрофореза, а гель накрывали листом целлулоида, слегка смазанного минеральным маслом. [c.61] Схематическое изображение прибора для электрофореза в агаровом геле на стеклянных пластинках. 1 — металлическая коробка с ножками на винтах и охлаждающее устройство 2 — стеклянная пластинка 3—агаровый гель 4 — агаровый гель или пенопласт 5 — электродные сосуды. Б. Шаблон для формирования щелей. [c.62] Гири [438—440] получил слой агарового геля на стеклянной пластинке, вмонтированной в пластмассовую рамку, прокладывая между стеклом и гелем лист целлофана, чтобы потом гель легко можно было снять со стекла. На основе этой работы была создана методика электрофореза на пластинках с агаровым гелем для разделения нуклеиновых кислот [1304—1307] м белков [630]. Поскольку она достаточно проста и может быть воспроизведена в любой лаборатории, мы рассмотрим ее подробно. [c.62] В лаборатории Лаурелла был разработан метод электрофореза в агарозном геле для разделения белков. Подробное описание прибора и методики можно найти в работе Йоханссона [630]. Электрофорез проводят в 17о-ном геле толщиной 1 мм на охлаждаемой водой стеклянной пластинке. Для охлаждения используют пластмассовую коробку с циркулирующей в ней водой (температура не выше 15 °С). Электрический контакт между разделяющим гелем и сосудами с буфером осуществляется через агарозные мостики. Канавки в геле для внесения 3— 10 мкл пробы, содержащей 10—100 мкг белка, получают при помощи сделанного из стальной бритвы шаблона с прямоугольными зубцами. Его помещают на пластинку сразу же, как только выливают а нее теплый раствор агарозы. Градиент напряжения при электрофорезе составляет 15—20 В/ом. [c.63] Электрофорез в агаровом или агарозном гелях можно проводить также в маленьких стеклянных трубочках аналогично диок-электрофорезу в полиакриламидных гелях. Чтобы при этом гели не вьгскальзывали из трубоч1ек, нижнюю часть их закрывают нейлоновой сеткой [286, 533, 534]. [c.63] Высушенные и окрашенные пленки можно покрыть разбавленным раствором канадского бальзама, при этом толуол быстро испаряется и препараты становятся пригодными для сканирования или хранения [1419]. [c.65] Вернуться к основной статье