Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English
Современная молекулярная биология гена явилась результатом методической революции, которая за несколько лет полностью изменила лицо эксперимента. Хотя ключевыми здесь являются генная инженерия р секвенирование ДНК, другие методические подходы сыграли не меньшую роль. Чтобы сделать ясным дальнейшее изложение, кратко остановлюсь на этих основных методических подходах.

ПОИСК





Методическая революция 70-х годов

из "Гены высших организмов и их экспрессия"

Современная молекулярная биология гена явилась результатом методической революции, которая за несколько лет полностью изменила лицо эксперимента. Хотя ключевыми здесь являются генная инженерия р секвенирование ДНК, другие методические подходы сыграли не меньшую роль. Чтобы сделать ясным дальнейшее изложение, кратко остановлюсь на этих основных методических подходах. [c.27]
Гель-электрофорез нуклеиновых кислот [34]. Если в 60-х годах разделение нуклеиновых кислот по молекулярным массам вели в основном путем ультрацентрифугирования в сахарозном градиенте, то в 70-х годах этот метод вытесняется методом электрофореза в геле. Впервые он был широко применен болгарским исследователем Р. Цаневым и сотр., и затем быстро завоевал общее признание. Оказалось, что в геле ДНК и РНК движутся тем быстрее, чем ниже их молекулярная масса. Пройденное расстояние обратно пропорционально логарифму молекулярной массы. Особенно важно, что разрешающая способность метода благодаря низкой диффузии гораздо выше, чем у ультрацентрифугирования. Для низкомолекулярных нуклеиновых кислот электрофорез ведется в полиакриламидном геле, для высокомолекулярных — в агарозном. Чем ниже концентрация геля, тем более высокомолекулярные нуклеиновые кислоты могут в нем разделяться. Подбирая условия, можно разделить как короткие олигонуклеотиды, отличающиеся по длине всего на один нуклеотид, так и молекулы ДНК размером до нескольких миллионов пар нуклеотидов. [c.27]
Одна из главных задач — поиск нужного клона. Если есть меченая проба , например кДНК, синтезированная на мРНК, то нужный клон находят с помощью гибридизации с колониями. Делают отпечаток с чашки, на которой растут колонии, на нитроцеллюлозном фильтре. Затем проводят гибридизацию фильтра с меченой ДНК и выявляют колонии, связывающие меченую пробу. Эти колонии далее пересевают и получают клон, содержащий нужный ген. Есть и много других методов вылавливания нужных клонов из их множества, получаемого на первом этапе эксперимента. [c.31]
Многочисленные усовершенствования методов позволяют сегодня в относительно короткие временные интервалы расшифровывать последовательности ДНК длиной в десятки тысяч нуклеотидов. [c.32]
Естественно, было разработано и много других важных методических подходов. С описанием некоторых из них мы встретимся ниже. Однако перечисленные выше сыграли решающую роль по крайней мере на первом этапе исследований. Они фактически вызвали революцию в молекулярной биологии гена эукариот. [c.32]


Вернуться к основной статье


© 2025 chem21.info Реклама на сайте