ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Гранулированный пористый оксид алюминия из "Аффинная хроматография Методы" Скорость потока в этом приборе приблизительно I мл/мин. Если используется полисахаридный носитель, то часто происходит уплотнение сорбента в колонке, что приводит к неустойчивой скорости потока. Считается, что полисахаридные носители не отвечают требованиям колоночного процесса по двум основным причинам 1) при клинических анализах в автоматическом режиме ( 50 анализов/ч) обычно требуются высокие скорости потока, при которых происходит уплотнение полисахаридных шариков, и 2) при разрушении полисахаридных шариков они могут образовывать комки, что также ограничивает применяемые скорости потока и уменьшает срок эксплуатации детектора [28]. [c.37] С целью удовлетворения этих требований был разработан гранулированный пористый оксид алюминия — кимал. [c.38] Количество связанного материала может быть определено термогравиметрическим анализом результат выражают в процентах (потеря массы после нагревания при 500 °С). [c.38] Исходные активности иммобилизованной на оксиде алюминия уреазы сопоставимы с активностями, достигаемыми при применении полисахаридных носителей, а стабильность полученных неорганических продуктов и измеряемые скорости потока оказались очень хорошими. В результате легко достигается быстрый анализ образцов. [c.39] При изучении многокомпонентной системы иммобилизованных ферментов для определения а-амилазы в биологических жидкостях [35] было продемонстрировано связывание субстратов с кималом. В этой системе был использован крахмал, присоединенный к активированному кислотой кималу по методике, описанной для ферментов [36]. Количество связавшегося субстрата определяли по адсорбции иода или термогравиметрическим анализом. В табл. 8 приведены данные по количеству субстрата, связанного с оксидом алюминия, для некоторых образцов. [c.40] На рис. 11 отражена последовательность движения образца при определении а-амилазы при помощи клинического прибора. При пониженных скоростях потока получены четыре пика. Считают, что эти пики отражают разделение изоферментов на колонке с иммобилизованным субстратом. Единственный пик, полученный при высокой скорости потока ( 0,5 мл/мин), был далее разделен на два пика при умеренной скорости потока ( 0,2 мл/мин, но 0,5 мл/мин), каждый из которых давал два хорошо разделенных пика при низкой скорости потока ( 0,2 мл/мин) таким образом, были получены все четыре пика. Литературные данные, касающиеся выхода с хроматографической колонки а-амилазы, указывают, что смесь компонентов а-амилазы может быть электрофоретически разделена на четыре компонента — два изофермента панкреатического происхождения и два изофермента из слюны [37]. [c.40] Уникальные свойства кимала, разработанного в лаборатории авторов, позволили использовать оксид алюминия в качестве неорганического носителя не только для иммобилизации ферментов, по и для получения аффинных адсорбентов. [c.40] Стекло с контролируемым размером пор — наиболее широко применяемая матрица неорганической природы для иммобилизации биологических молекул. Относительно небольшое число работ посвящено использованию стекла в качестве матрицы для аффинной хроматографии. Известно, что немодифицирован-ное стекло неспецифически адсорбирует ферменты и заметно растворимо при щелочных pH ( 8,0). Стекло обладает высокой механической прочностью, термической устойчивостью и, будучи аэрогелем, химически совместимо с большинством органических растворителей. [c.41] Стекло с контрол]фуемым размером пор содержит 96% диоксида кремния и 4% бората со следами других неорганических оксидов. Основная часть общего содержания бора (до 30% бората) приходится на поверхностные слои стекля. Расположенные на поверхности остатки борсодержащих кислот Льюиса вызывают адсорбцию нуклеофилов, таких, как аминогруппы белков и/или ионы аммония, с образованием положительно заряженных центров, приводящих к неспецифической адсорбции. [c.41] Реакция может быть проведена в безводной или водной среде. В безводной среде получают монослой силана, в то время как реакция в водной среде приводит к полимерному слою. Методика в водной среде проста и обеспечивает лучшее покрытие для силанольных групп, вызываюш,их денатурацию и неспецифическую адсорбцию. Полимеризованный слой может быть более устойчив также к гидролитическому расщеплению 139]. [c.42] НО было осторожно перемешивать смесь для образования суспензии силикагеля в буфере. [c.44] Не следует использовать магнитную мешалку из-за возможного размалывания силикагеля, что неблагоприятно сказывается на эффективности хроматографии. [c.44] Для суспендирования силикагеля требуется не менее 4 мл буфера на 1 г силикагеля. Надо брать по крайней мере 4-крат-ное количество силана относительно теоретического (для образования монослоя силана). Необходимое количество силана можно рассчитать, используя данные фирмы-производителя по площади поверхности силикагеля (м /г) теоретически для образования монослоя диола необходимо 2,3 мкмоль/м [40] молекулярная масса силана равна 236,3 г/моль плотность 1,070 г/мл. При концентрации силана менее 2% (об./об.) необходимо использовать больший избыток последнего. [c.44] В случае необходимости содержание диола на силикагеле может быть определено с использованием метода периодатного окисления [41]. [c.44] Приведенная модификация периодатного метода [41] удобна для определения диола при содержании 10 мкмоль. Метод может быть применен как для больших, так и для меньших концентраций диола при использовании пропорционально больших или меньших объемов всех реагентов. [c.45] Вернуться к основной статье