ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Методы приготовления препаратов микроорганизмов для электронной микроскопии из "Руководство к практическим занятиям по микробиологии Изд.3" Как уже отмечалось (6.1.5.), электронный микроскоп позволяет исследовать только неживые обезвоженные объекты. Способы подготовки микроорганизмов к наблюдению в сканирующем (СЭМ) и трансмиссионном (ТЭМ) электронных микроскопах имеют свои особенности. [c.114] Приготовление препаратов включает процессы фиксации, обезвоживания, пропитки и заливки специальными смолами. [c.114] Подготовка клеток включает три этапа фиксацию, обезвоживание, напыление металлом. [c.115] Фиксация. 20—50 мг сырой биомассы микроорганизмов помещают в 5 мл фосфатного буфера (0,1 н., pH 7,2) в центрифужных пробирках, перемешивают и центрифугируют при 6 000 об/мин 5 мин. К осадку добавляют 2 мл глутарового альдегида в 18 мл того же фосфатного буфера, перемешивают и оставляют на 1 ч в темноте. Затем клетки центрифугируют и промывают фосфатным, буфером. [c.115] Обезвоживание. Процесс обезвоживания проводят, последовательно помещая осадок клеток на 5 мин в водные растворы этанола концентрации 50, 60, 70, 96 и в конце 100°, каждый раз центрифугируя. Полученный осадок переносят в маленькие бюксы, которые оставляют на ночь открытыми в вытяжном шкафу для полного испарения ацетона. Далее проводят досушивание в критической точке. [c.115] Напыление металлом. На поверхность поддерживающего столика наносят тонкий слой клея или лака, на который помещают небольшое количество полученного материала. Столики в специальном приборе напыляют металлом в течение 15 мин. [c.115] Микроорганизмы для наблюдения в СЭМ можно подготовить на покровном стекле. Культуру или промытые фосфатным буфером клетки наносят на осколок обезжиренного покровного стекла и высушивают на воздухе. Стекло помещают на 1 ч в глутаровый альдегид (2,5%-ный раствор в фосфатном буфере, 0,1 н., pH 7,2) и промывают затем фосфатным буфером. Далее обезвоживают клетки, последовательно помещая стекла в водные растворы этанола (20, 25, 50, 70, 96 100°) на 15 мин в каждый и в амилацетат или чистый ацетон на 1 ч. Досушивают в критической точке. Сухие мазки готовы для напыления и просмотра в СЭМ. [c.115] С целью изучения архитектоники колоний микроорганизмов их выращивают на мембранных фильтрах (Владипор, 2—5) л проводят фиксацию и обезвоживание в щадящем режиме. Фильтры стерилизуют и помещают на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри, инокулируют культурой в определенном разведении и инкубируют в подходящем режиме. Выросшие колонии подвергают фиксации и обезвоживанию, последовательно помещая фильтры в чашки Петри, крышки которых покрыты внутри фильтровальной бумагой, пропитанной следующими веществами 25%-ный глутаровый альдегид, на 20—30 мин, безводный ацетон или пропиленоксид, 2 раза по 20 мин. После напыления металлом колонии исследуют в СЭМ. [c.115] Вернуться к основной статье