ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение количества клеток и биомассы нефелометрнческим методом из "Руководство к практическим занятиям по микробиологии Изд.3" В основе метода лежит измерение уменьшения количества света при его прохождении через суспензию клеток. В определен-ных пределах оно обусловлено преимущественно рассеянием света клетками и пропорционально их концентрации. Величина этого показателя зависит от многих факторов (формы и размеров клеток, оптических свойств культуральной среды, длины волны падающего света и т. д.). Поэтому нефелометрический метод пригоден лишь для тех микроорганизмов, рост которых вызывает равномерное помутнение среды и не сопровождается заметным изменением формы и размеров клеток, образованием мицелия, пленок или других скоплений. [c.131] Питательная среда для культивирования микроорганизмов, в которой предполагается определять число клеток по светорассеянию, должна быть оптически прозрачной. Если мутность среды связана с выпадением в осадок некоторых солей, чаще всего фосфатов, то перед измерением светорассеяния ее подкисляют несколькими каплями концентрированной соляной кислоты. [c.131] Изменение интенсивности света при прохождении через суспензию клеток измеряют с помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК) или спектрофотометра, выбирая длину волны (обычно в интервале 540—650 нм), при которой поглощение света данной суспензией клеток является минимальным. Так, рассеяние света, вызываемое суспензией клеток в мясо-пептонном бульоне или сусле, наиболее удобно измерять с красным фильтром, пр.и котором оптическая плотность таких сред минимальна. При высоких концентрациях клеток в культуральной среде происходит вторичное рассеяние света, что приводит к получению заниженных результатов. Поэтому суспензии больших плотностей перед измерением светорассеяния следует разводить средой или водой. Разбавление проб одной и той же культуры разными жидкостями недопустимо, так как набухание и сжатие клеток влияет на величину светорассеяния. [c.131] Правила работы на фотоэлектроколориметре и порядок измерения величины светорассеяния подробно изложены в инструкции, прилагаемой к прибору. [c.131] В некоторых случаях плотность клеточной суспензии выражают в показаниях нефелометра. Однако чаще строят калибровочные кривые зависимости между величиной светорассеяния и числом клеток или сухой биомассой в единице объема. Для построения калибровочной кривой поступают следующим образом. Измеряют величину светорассеяния суспензий с различным содержанием клеток и в каждой из них определяют одним из применяемых методов количество клеток или биомассу. Полученную зависимость выражают графически, откладывая на оси ординат показания ФЭК, а на оси абсцисс — количество клеток, содержащихся в 1,0 мл суспензии, или биомассу в г/л. Для каждого микроорганизма следует строить свою калибровочную кривую. [c.131] В ряде случаев количество клеток в суспензии бывает достаточно определить визуально путем сравнения со стандартом мутности. Стандарты мутности, выпускаемые государственным НИИ стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича, представляют собой взвесь частиц стекла пирекс в дистиллированной воде. За единицу стандарта мутности общего назначения условно принята мутность суспензии в физиологическом растворе бактерий — возбудителей тифа с концентрацией клеток 100 млн/мл. Стандарт мутности включает 4 эталона на 10, И, 9 и 5 единиц, что соответствует содержанию ЫО 1,1-10 0,9-10 и 0,510 клеток в 1 мл взвеси. Для определения количества клеток пробирку с исследуемой суспензией ставят рядом с эталоном 10 и рассматривают их в отраженном и проходящем свете на фоне белого листа бумаги, в центре которого нанесено несколько черных линий. Эталоны 9 и 11 являются вспомогательными и позволяют более четко сравнить мутность исследуемой суспензии с эталоном. Стандартизация мутности суспензии бактерий (особенно часто в случае тест-организмов) имеет существенное значение при приготовлении посевного материала в серийных опытах, например, при определении антибиотической активности препаратов методом диффузии в агар. [c.132] Вернуться к основной статье