ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Экспресс-метод определения биомассы из "Биогеотехнология металлов Практическое руководство" Прямой подсчет клеток бактерий проводят на предметных стеклах или в различного типа камерах, например, в камере Тома, Петрова, Хаузера и т.д. [30, 36]. Эти методы хорошо известны микробиологам, но мало применяются для учета хемолитоавтотрофных бактерий. Ниже приводится ряд новых методов учета T.ferrooxidans. Особенностью этих методов является то, что они позволяют не только определить количество бактерий, но и дифференцировать представителей различных видов тиобацилл. Это очень важно, поскольку на одних и тех же средах часто растут бактерии разных таксонов и их быстрая идентификация затруднительна. [c.74] Окрашенные фильтры помещают на предметные стекла в несколько капель ФС глицериновой смеси (1 9 об/об) и покрывают покровным стеклом. [c.75] Фильтры на предметном стекле просматривают в люминесцентном микроскопе. Число флюоресцирующих клеток на площади фильтра 0,01 мм определяют при подсчете 50 таких площадей для каждого образца с помощью окулярной сетки. Число клеток в 1 мл образца рассчитьтают как значение числа клеток на площади 0,01 мм , умноженное на 10 . [c.75] Джейтс и Холмс [150] предложили для этих целей метод использования молекулярных проб, состоящих из клонированных, последовательностей ДНК. При наличии соответствующей базы эти методы могут быть использованы в лабораторной практике. [c.75] При чановом выщелачивании металлов приходится иметь дело с большой биомассой бактерий, причем оценивать ее необходимо в пульте, т.е. в жидкой и твердой фазах, в короткие периоды времени. Вьпиеперечислен-ные методы малопригодны для этих целей. Ниже предлагается ряд методов, разработанных для учета биомассы T.ferrooxidans в технологических процессах. [c.75] Концентрацию сырой биомассы в культуре можно определить по Коврову и др. [28] центрифужным методом. Для этого в специальную пробирку, изготовленную из оргстекла (рис. 2.1), наливают некоторый объем культуры, например, 5 мл и центрифугируют при 6000 об/мин в течение часа. [c.75] После этого по отградуированному узкому цилиндру пробирки определяют объем упакованных клеток. Объем пробирки должен быть около 5 мл, но при работе с разбавленными культурами порядка 0,1 г/л биомассы объем может быть увеличен до 25-50 мл. Внешние размеры пробирки определяются посадочным гнездом применяющейся центрифуги, которая должна иметь ротор с поворотными стаканами. Измерительная часть пробирки -цилиндрическое сверление диаметром 1,5-3 мм (чем тоньше сверление и длиннее измерительный Цилиндр, тем точнее измерение), Объем всего измерительного канала пробирки должен быть примерно вдвое больше, чем среднее ожидаемое количество биомассы клеток в объеме культуры, помещаемом в пробирку для измерения концентрации. Градуировка пробирки проводится следующим образом. В пробирку вводится вода в количестве, которое по расчету должно заполнить ее измерительный канал (количество воды определяется взвешиванием пробирки). Кратковременным центрифугированием вода осаживается в измерительный канал пробирки и по верхнему уровню воды наносится метка. После этого расчетным путем определяются и наносятся все промежуточные метки. Например, в пробирке, рассчитанной на 5 мл культуры, удобно наносить метки через 5 мг воды в канале. Тогда каждое деление измерительного цилиндра пробирки соответствует концентрации сырой биомассы в г/л. [c.76] Предполагается, что удельный вес сырой биомассы бактерий мало отличается от единицы. Снятие отсчета по шкале проводят с точностью 1/4 деления, т.е. 0,25 г/л, что соответствует при концентрации сырой биомассы 10 г/л ошибке 2,5% измеряемой величины. [c.76] Для определения концентрации сухой биомассы клеток пользовались пересчетным коэффициентом 0,26 - отношение массы сухих клеток к сырым, которое периодически в ходе экспериментов проверялось весовым методом. [c.77] Вернуться к основной статье