ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Принципы исследования активных центров рецепторов из "Биохимия мембран Рецепторы клеточных мембран" Локализация активного центра. С помощью протепназ, имеющих оптимум действия в нейтральной среде (например, трипсин), можно расщепить молекулу изолированного рецепторного белка на несколько функционально-активных доменов. В гл. 2 приведены результаты подобного исследования, выполненного на рецепторе эпидермального гормона роста. Кратковременная обработка самых разнообразных клеток трипсином позволяет отщепить внеклеточные участки рецепторов различной специфичности. При этом не происходит разрущения активного центра, расположенного в пределах этого участка, что позволяет с использованием иммобилизованного лиганда изолировать внеклеточные участки рецепторов данной специфичности. [c.44] Сведения об инактивации рецептора после удаления его углеводного и липидного компонентов не могут служить достаточным основанием для заключения, что именно эти компоненты отвечают за лигандсвязывающие свойства рецептора. Вероятно, эти данные означают, что небелковые компоненты рецептора существенны для поддержания такой конформации его молекулы, которая необходима для обеспечения пространственной доступности активного центра для лиганда. Что касается собственно активного центра, то он, как правило, формируется полипептидной цепью (цепями) молекулы рецептора и находится в N-концевой части рецепторного белка. [c.45] Идентификация аминокислоп ых остатков в активном центре. С этой целью используют метод метки по сродству (см. гл. 1). Препараты рецепторов должны быть высокоочищенными. Лиганды с хорощо изученной структурой модифицируют с таким расчетом, чтобы они образовывали в активном центре рецептора ковалентные связи с боковыми аминокислотными остатками отрезков цепи, формирующих центр. Чаще других используют бромацетильные прс изводные и фотоактивируемые производные лигандов. Доказательством фиксации лиганда именно в активном центре служит факт необратимого блокирования им центра, препятствующего связыванию немодифицированного меченого лиганда. [c.45] Иммунологические методы. К очищенным рецепторам могут быть получены антитела как с помощью обычной техники иммунизации лабораторных животных, так п с использованием техники гибридом. Такие антитела можно использовать для сравнительной характеристики различных по специфичности рецепторов и для сопоставления строения активных центров рецепторов и антител, связывающих одни и те же лиганды. [c.46] Высокая чувствительность иммунологических методов открывает перед экспериментатором большие возможности как при сравнительном изучении строения, так и при исследовании биосинтеза клеточных рецепторов. Насколько эффективны эти методы для решения актуальных задач по изучению клеточных рецепторов, будет продемонстрировано в следующем разделе настоящей главы. [c.46] Вернуться к основной статье