ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Кинетика и термодинамика реакции гаптен-антнтело из "Молекулярная иммунология" Получение экспериментальных данных, необходимых для вычисления основных параметров реакции антитела со специфическим лигандом, возможно с достаточной точностью лишь в том случае, когда лиганд одновалентен и как всякий одновалентный гаптен не Ведет к образованию больших по размеру и сложных по составу агрегатов. В случае образования комплексов, состоящих из нескольких молекул антигена и антитела, система настолько усложняется, что реакция не может быть описана простыми уравнениями. [c.104] Источником антител для оценки кинетических параметров реакции служили до последнего времени очищенные антитела против простых гаптенов и моноклональные миеломные иммуноглобулины с гаптенсвязывающей активностью. Первые из них неоднородны в том числе и по степени сродства (скорость реакции) с лигандом. Поэтому в подобных случаях получают лишь усредненные значения тех пли иных параметров. [c.104] В ходе реакции гаптен-антитело (когда гаптен имеет небольшую молекулярную массу и одновалентен) не происходит никаких взаимных превращений гаптена и антитела. Поэтому о их взаимодействии судят с помощью различных физических и физико-химических методов. Эти методы основаны на оценке количества связанного гаптена по изменению диффузионного равновесия последнего в присутствии антитела (метод равновесного диализа ) или по изменению оптических свойств гаптена после его связывания антителом. [c.104] Наиболее эффективный способ оценки скорости реакции, потребовавший использования уникального оборудования, был предложен и апробирован в Институте им. [c.104] Макса Планка (ФРГ). Этот метод основан на оценке скорости изменения равновесия в системе гаитен-антите-ло ири дискретном увеличении температуры за крайне короткие промежутки времени. Сконструированная аппаратура на основе гигантского конденсатора (10 000 эрстед) при его разряде за 0,1 мкс позволяла повысить температуру смеси гаптен-антитело на 10°С. За это время успевало установиться равновесие, что свидетельствует об очень высокой скорости реакции, реальное измерение которой сложно с технической точки зрения. [c.105] На основе сведений, полученных при оценке константы равновесия при нескольких значениях температуры, можно вычислить основные термодинамические параметры реакции гаптен-антитело. [c.105] Поскольку при взаимодействии антитела с гаптеном подвижность реагирующих соединений (обусловленная броуновским движением в растворе) умень шается, а вместе с этим уменьшается степень неупорядоченности системы, следует ожидать изменения конфигурационной энтропии. При этом величины Л5° должны были бы принимать отрицательные значения. Однако в силу того, что некоторые гаптены имеют заряд, величина которого уменьшается при взаимодействии с антителом, в ходе реакции высвобождается часть связанной гаптеном и антителом воды. Кроме того, при реакции гаптен-антитело изменяется общая конфигурация молекулы антитела, обусловленная изменением подвижности РаЬ-участков относительно Рс-участка (см. гл. 3). Этот факт также способен повлиять на степень гидратации молекулы антитела вне зависимости от заряда гаптена. Обусловленное высвобождением воды положительное изменение энтропии способно в отдельных случаях полностью компенсировать уменьшение энтропии системы за счет самой реакции гаптен-антитело, В свете сказанного сравнительные оценки величин А8° для реакции различных по специфичности антител со своими гаптенами вряд ли правомерны. [c.107] Вопросы, касающиеся реакции антител с поливалентными антигенами, будут рассмотрены в гл. 12. [c.107] Вернуться к основной статье