ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Биохимические свойства микробов и методы их изучения из "Микробиология с техникой микробиологических исследований изд.4" В жизнедеятельности микробов ферменты играют большую роль. Они являются обязательными участниками разнообразных биохимических реакций, лежащих в основе функций питания, дыхания, размножения. По характеру связи с цитоплазменными структурами и по месту проявления своего действия ферменты делятся на внутри- и внеклеточные. Каждый вид микроорганизмов продуцирует постоянный для него набор ферментов, одни из которых расщепляют в разной степени белки и углеводы, а другие вызывают окисление и восстановление различных субстратов. [c.60] Стабильность ферментативных систем бактерий позволяет использовать биохимические свойства бактерий в сочетании с их морфологическими, культуральными и другими постоянными признаками для определения видов и типов бактерий. [c.60] Для обнаружения ферментов исследуемую культуру микробов засевают на специальные дифференциально-диагностические питательные среды (с. 37). [c.60] Сахаролитические ферменты микробов. Свойство расщеплять углеводы и высокоатомные спирты, которые принято объединять в одну группу, именуемую сахарами, присуще многим патогенным микробам. Под действием сахаролитических ферментов бактерий сахара расщепляются на альдегиды и кислоты. Конечными продуктами их расщепления являются газообразные вещества СОг и На. [c.60] Характерно, что различные виды и даже разновидности микробов относятся по-разному к одним и тем же сахарам. [c.60] например, одни бактерии, ферментируя лактозу, остаются нейтральными в отношении глюкозы, другие, наоборот, сбраживают глюкозу, а третьи, наиболее активные, вызывают расщепление и глюкозы, и лактозы. [c.61] Для обнаружения сахаролитических ферментов исследуемую культуру бактерий засевают в питательные среды Гис-са, называемые также пестрым рядом. Пестрый ряд Гисса содержит обычно 5 пробирок с глюкозой, лактозой, маннитом, мальтозой и сахарозой. При некоторых исследованиях для более углубленного изучения биохимических свойств выделенного микроба ряд Гисса дополняют дульци-том, сорбитом, ксилозой, арабинозой и некоторыми другими сахарами. [c.61] Название пестрый ряд обусловлено тем, что под действием ферментов микроба одни углеводы остаются неизменными и, следовательно, цвет питательной среды не меняется, в то время как другие сахара расщепляются, образуя кислые продукты распада, которые изменяют цвет индикатора и соответственно цвет питательной среды. [c.61] Среды Гисса бывают жидкими и полужидкими (с добавлением 0,2—0,5% агар-агара). В пробирки с жидкими средами Гисса для обнаружения газов, являющихся конечными продуктами распада сахаров, опускают поплавок — трубочку диаметром 0,5—0,7 см, запаянную с одного конца. Поплавок помещают запаянным концом кверху при стерилизации он полностью заполняется питательной средой. При образовании в среде газообразных продуктов они вытесняют часть жидкости, находящейся в поплавке , вследствие чего у запаянного конца его собирается воздушный пузырек. [c.61] Для выявления газообразных продуктов, образующихся в жидкой среде при культивировании микроорганизмов, Я. 3. Зимин (1969) вместо поплавков предложил пользоваться поролоновой губкой. Ее нарезают кубиками такой величины, чтобы, находясь в пробирке, они не касались ее стенок. Кусочки поролона опускают в питательную среду до ее стерилизации. При автоклавировании пузырьки газа из пор губки вытесняются паром и после остывания заполняются питательной средой, в связи с чем губка опускается на дно пробирки. Если в среде, засеянной микроорганизмами, образуется газ, он задерживается в порах губки и она всплывает на поверхность среды. При этом сквозь полупрозрачную ткань поролона хорошо видны образующиеся пузырьки газа. [c.61] В полужидких средах Гисса газообразование определяют по наличию мелких пузырьков газа в толще среды и стойкой пены на ее поверхности. [c.61] Пробирки с набором сред Гисса ставят в штатив в один ряд. На каждой пробирке надписывают название сахара, содержащегося в среде. На первой пробирке каждого ряда, кроме названия сахара, указывают номер или вид исследуемой микробной культуры. Культуру берут на кончик петли в очень небольшом количестве и засевают по общепринятой методике (с. 48). [c.62] Протеолитические ферменты микробов. Некоторые виды микроорганизмов продуцируют и выделяют во внешнюю среду протеолитические ферменты — протеазы, катализирующие расщепление белков. В результате расщепления молекулы белка образуются высокомолекулярные промежуточные продукты распада — пептоны, альбумозы и полипептиды. Под действием других протеолитических ферментов пептоны в свою очередь расщепляются на полипептиды (соединения двух или нескольких аминокислот) и отдельные аминокислоты. [c.62] Для выявления протеолитических фермегхтов исследуемую культуру микроба засевают в питательную среду, содержащую тот или иной белок. Чаще всего для этой цели применяют желатин, реже — свёрнутую лошадиную сыворотку, коагулированный яичный белок, молоко или кусочки вареного мяса. [c.62] Протеолитическая активность одного и того же микроба при определении ее на разных питательных средах будет проявляться неодинаково, что обусловлено специфичностью ферментов. Поэтому для разных видов микробов рекомендуют питательные среды различного состава. [c.62] Аналогичным образом проявляются протеолитические свойства микробов в средах с кусочком вареного мяса. [c.63] Некоторые виды патогенных микробов с выраженной протеолитической активностью обладают способностью расщеплять белок и пептон до продуктов глубокого распада индола, сероводорода, мочевины и аммиака. [c.63] При определении видов и дифференциации разновидностей патогенных микробов наибольшее значение имеет выявление двух первых продуктов индола и сероводорода. [c.63] Определение сероводорода. Сероводород является конечным продуктом расщепления аминокислот ци-стина, цистеина и метионина, содержащих серу. Петлю исследуемой культуры микробов засевают в пробирку с мясо-пептонным бульоном или бульоном Хоттингера. Тотчас после посева в пробирку вносят пропитанную ацетатом свинца полоску индикаторной бумаги на определение сероводорода (рец. 30, с. 349). В положительных случаях образующийся в культуре сероводород вступает в соединение с бесцветным ацетатом свинца и превращается в сульфат свинца, который придает индикаторной бумаге черно-бурое окрашивание. [c.64] Вернуться к основной статье