ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Реакция агглютинации из "Микробиология с техникой микробиологических исследований изд.4" Агглютинацией называется обнаруживаемое невооруженным глазом склеивание и выпадение в осадок микробных тел при взаимодействии их со специфическими антителами — агглютининами. Видимая фаза агглютинации наступа- ет в присутствии раствора электролита. Агглютинины содержатся в сыворотке крови человека и животных, перенесших инфекцию или искусственно иммунизированных соответству-ЮШ.ИМ видом микроба. [c.118] Благодаря специфичности и простоте постановки реакция агглютинации получила широкое распространение в микробиологической практике для диагностики многих инфекционных заболеваний. [c.118] Приготовление разведений сыворотки больного. Из сыворотки, с которой предполагается ставить реакцию агглютинации, готовят ряд последовательных двухкратных разведений, чаще всего от 1 50—1 100 до 1 1600— 1 3200. В отдельной пробирке готовят первое, основное, раз- ведение сыворотки, обычно 1 50 или 1 100. Для этого градуированной пипеткой емкостью 1 мл набирают 0,1 мл сыворотки, другой пипеткой емкостью 10 мл прибавляют к ней 4,9 мл (1 50) или 9,9 мл (1 100) изотонического раствора хлорида натрия. Жидкость в пробирке тщательно перемеши-ъают, набирая ее в пипетку и выдувая в пробирку. Основной -раствор сыворотки используют для приготовления ряда последовательных разведений. [c.118] Таким образом, разведение сыворотки в первой пробирке соответствует основному ее разведению (1 100) в последующих пробирках получается ряд последовательных двукратных разведений 1 200, 1 400, 1 800, 1 1600. [c.119] Вместо 1 мл можно разливать в пробирки по 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия и соответственно прибавлять по 0,5 мл основного разведения сыворотки, в результате чего объем окончательных разведений сыворотки во-всех пробирках будет составлять 0,5 мл. [c.119] По окончании разведений во все пробирки ряда, за исключением КС, прибавляют по 1—3 капли антигена, содержащего 2 млрд. живых или убитых микробных тел в 1 мл. После этого жидкость в пробирках становится слегка мутноватой. [c.119] После добавления антигена к разведенной сыворотке щтатив с пробирками встряхивают для лучшего перемещивания сыворотки с изотоническим раствором хлорида натрия, ставят на 2 ч в термостат при 37°С, а затем учитывают предварительный результат реакции. Окончательный результат регистрируют через 18—20 ч стояния пробирок при комнатной температуре (табл. 11). [c.119] Для выявления мелкозернистого О-агглютината приходится пользоваться агглютиноскопом или вогнутым зеркалом. [c.120] Учет результатов реакции агглютинации начинают с просмотра контрольных пробирок. Реакция может считаться положительной лишь в том случае, если в пробирках с контро-лями жидкость остается совершенно однородной в КА — слегка мутной, в КС — прозрачной. [c.120] Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдается агглютинация, считают ее титром. [c.120] Неизвестный щтамм микроба испытывают в реакции агглютинации с разведенной до титра иммунной диагностической сывороткой. За титр принимают конечное разведение сыворотки, при котором происходит еще отчетливая агглютинация соответствующего ей вида микроба. [c.121] Предположим, что иммунная сыворотка агглютинирует соответствующий ей микроб до разведения 1 12 800. Следовательно, титр данной сыворотки равен 1 12 800. [c.121] Приготовление разведений диагностической иммунной сыворотки. При определении вида-микроба пользуются набором диагностических агглютинирую- щих сывороток. Их готовят в лаборатории, иммунизируя кроликов соответствующим антигеном, или получают в готовом виде из производственных институтов, изготовляющих бактерийные препараты. Сыворотки выпускают в высушенном виде. На этикетках ампул указаны срок годности и титр сыворотки. [c.121] 1 мл (разведения А) -Ь 9 мл изотонического раствора хлорида натрия =. 1 1000. [c.121] 1 мл (разведения В) Н- 9 мл изотонического раствора хлорида натрия =. 1 100 000. [c.121] Из основных разведений сыворотки, условно обозначен-мых А, Б, В и Г, готовят необходимые для постановки реакции разведения, придерживаясь при этом схемы расчета, дан- ой в табл. 12. [c.121] При проведении основного опыта в штатив устанавливают ряд агглютинационных пробирок, количество которых определяется титром иммунной сыворотки. Количество рядов соответствует числу диагностических сывороток, участвующих в опыте. [c.122] Соответствие между видом или типом микроба и диагностической агглютинирующей сывороткой считается достоверным при условии четко выраженной реакции агглютинации в пробирках с разведением сыворотки в пределах ее титра и выше (табл. 12). [c.122] Вернуться к основной статье