ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы ОБОРУДОВАНИЕ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ В ЦИТОЛОГИИ из "Практикум по цитологии растений Изд.4" Изучать организмы растений и животных на клеточном уровне можно только при помощи микроскопической техники. Какой микроскоп выбрать для работы Как им пользоваться Какие к нему нужны принадлежности Какой метод наблюдения следует применить, чтобы использовать оптический прибор наиболее целесообразно Чтобы ответить на все эти вопросы, следует познакомиться с разнообразной микроскопической техникой и методами исследований. [c.5] Далеко не всякий микроскоп подходит для тонких исследований клетки и ее компонентов и не каждый метод наблюдения позволяет реализовать возможности, заложенные в конструкции данного оптического прибора. Распространено неверное представление о том, что качество микроскопа определяется его увеличением. Между тем увеличение — это только техническая характеристика прибора, не дающая точного представления о его качестве и назначении. [c.5] Для примера рассмотрим биологические микроскопы МБР-3 и МББ-1. Общее увеличение у первого составляет 2020, у второго— 1600. Может показаться, что первый микроскоп лучше. Однако один из них рабочий, а другой исследовательский, и они имеют существенные различия по качеству объективов. [c.5] Осветительная система (конденсор и зеркало), объективы и окуляры вместе с тубусом составляют оптический узел, в котором все составные части строго центрированы по отношению друг к другу. [c.6] Конденсор расположен под столиком микроскопа и состоит из двух или трех линз. Различают несколько типов конденсоров в зависимости от метода наблюдения конденсор светлого поля (рис. 2,Л), конденсор темного поля (рис. 2,Б), конденсор для наблюдения по методу фазового контраста, конденсор с апертурной диафрагмой для косого освещения и др. Современные микроскопы снабжены апланатическим конденсором ОИ-14 для прямого и косого освещения. Для темного поля выпускают конденсор ОИ-13. Во время работы конденсор приводят в соответствующее положение, поднимая и опуская его специальным винтом. Под конденсором микроскопа находится ирисовая диафрагма. [c.6] Зеркало микроскопа имеет две поверхности — плоскую п вогнутую. Оно располагается под конденсором, направляя в него свет. Из конденсора пучок света попадает на препарат, находящийся на столике микроскопа, а затем входит в объектив. Таким образом, зеркало и конденсор предназначены для освещения препарата. [c.6] ИЛИ размазанным, искривленным, т. е. возникнут аберрации. Различают следующие типы аберраций. [c.7] Сферическая аберрация,, при которой изображение точки передается в виде кружка рассеяния. При наложении таких изображений друг на друга понижается контрастность. Астигматизм возникает, если изобр ажение точки передается в виде кружка рассеяния, имеющего не круглую, а эллипсовидную форму. Кома — вид аберрации, при котором резкость изображения снижается от центра к границе поля зрения вследствие нарушения симметрии светового пучка. В изображении точки наблюдается односторонняя деформация. Кривизна поля зрения не позволяет одновременно видеть резко центр и края поля зрения. Дисторсия возникает, если нарушается подобие между объектом и его изображением из-за того, что линейное увеличение в центре и на краях поля зрения разное. [c.7] В зависимости от устранения рассмотренных выше аберраций различают оптику анастигматическую — свободную от астигматизма, апланатическую- — без комы и сферической аберрации, ортоскопическую — без дисторсии. [c.7] Кроме указанных выше, существуют еще хроматические аберрации, при которых изображение, созданное зелеными лучами, не совпадает с созданным синими и красными. При этом различают хроматизм положения, когда изображения различных цветов располагаются на неодинаковом расстоянии от оптической системы, и хроматизм увеличения, когда изображения различных цветов, хотя и находятся в одной плоскости, но имеют неодинаковые размеры. [c.7] Знакомство с различными видами аберраций показывает, что для получения качественного изображения, создаваемого объективом, необходимо максимально устранить недостатки оптической системы. В противном случае изображения объектов будут нерезкими, их фбрма и размеры будут значительно искажены или возникнут цветные окаймления (при хроматизме положения). [c.8] У объективов ахроматов и апохроматов не устранена полностью кривизна изображения, при которой изображение оказывается размытым на краях поля зрения, что особенно неудобно при микрофотосъемке. Для устранения этого недостатка созданы объективы с плоским полем зрения — планахроматы и планапохроматы. [c.8] На оправе иммерсионных объективов имеются канавки разного цвета в зависимости от вида иммерсии. На объективе масляной иммерсии канавка окращена в черный цвет, кроме того, на оправе стоит отметка МИ . На объективе водной иммерсии канавка белая, а на оправе — отметка ВИ . Второй объектив удобен для изучения объектов, заключенных в воду, что позволяет работать без покровного стекла, например, в фитопатологии. На объективе глицериновой иммерсии канавка окрашена в желтый цвет. [c.8] Объектив дает геометрически подобное объекту увеличенное изображение с обратным расположением частей по отношению к препарату и в то же время выявляет подробности, недоступные глазу человека (или, как говорят, разрешает структуру). Обратное изображение заставляет наблюдателя передвигать объект при помощи препаратоводителя в направлении, обратном кажущемуся если нужно передвинуть изображение влево, то препарат необходимо переместить вправо, и наоборот. [c.8] Поскольку разрешающая способность зависит также от способа освещения препарата и контраста последнего, то реальная разрешающая способность ниже той, что получится при вычислении по формуле 2. [c.9] Поскольку показатель преломления воздуха равен 1, то Л может изменяться у сухих объективов от О до 1. Если а = 90°, а sin 90°= 1, следовательно, Л=1, sin40°=0,64, Л = 0,64. Чем больше угол а, тем выше апертура и тем лучше разрешающая способность объектива, т. е. он позволяет рассмотреть более мелкие детали. Качественные сухие объективы имеют Л, равное 0,95. Наименьшая видимая структура при такой апертуре составляет 0,35 мкм. Иммерсионные объективы имеют более высокие значения Л, чем сухие, так как показатель преломления жидкостей больше единицы. Например, вода имеет /г=1,33, кедровое масло—1,515. Наиболее высокая апертура у масляно-иммерсионных объективов (Л =1,4). Числовую апертуру указывают на оправе объектива. [c.9] Об — объектив ОР — фокальная плоскость Р — препарат Кн — конденсор й — диафрагма конденсора. [c.10] Разрешающая способность объектива, т. е. способность его давать раздельное изображение точек объекта, расположенных близко друг к другу, зависит не только от апертуры, но и от длины волны света. При освещении обычным светом (А. = 0,55 мкм) и использовании объектива с апертурой 1,4 наименьший диаметр видимых частиц 0,24 мкм. Уменьшая длину волны света, можно Завидеть более мелкие частицы и тем самым улучшить разрешающую способность объектива. Расчеты показывают, что при освещении сини.ми лучами (А, = 0,47 мкм) можно увидеть частицы величиной 0,2 мкм. Для этого используют синие светофильтры. [c.10] Вернуться к основной статье