ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Оборудование, специальные материалы и реактивы из "Методы очистки белков" Остается сказать о том минимуме основного оборудования, который должна иметь в своем распоряжении каждая лаборатория по очистке ферментов. Активность ферментов обычно измеряют с помощью спектрофотометрических или радиохимических методов. Если все определения проводят спектрофотометрическим способом, то можно обойтись и без сцинтилляционно-го счетчика. Спектрофотометр же обязательно должен быть в лаборатории, так как он требуется, кроме того, и для измерения концентрации белков (разд. 8.5). К оборудованию первой необходимости относится спектрофотометр с УФ-лампой, желательно с самописцем для записи хода реакций во времени. [c.11] При очистке ферментов лишь в редких случаях можно избежать центрифугирования. В промышленных масштабах для отделения осадка обычно используют фильтрационные системы, но в лаборатории более удобна центрифуга. Принципы и методы центрифугирования изложены ниже (разд. 1.2). В большинстве случаев нужна стандартная постоянно работающая центрифуга с охлаждением до 0°С или немного ниже при этом эффективность центрифугирования, выражающаяся произведением относительной величины g на емкость в литрах, должна быть порядка 10 ООО— 15 ООО. Можно использовать множество центрифуг других типов — от настольных до препаративных ультрацентрифуг. Но они не всегда нужны и вряд ли будут применяться при очистке ферментов так же часто, как типовая центрифуга, описанная выше. [c.11] Нужны также гомогенизаторы для разрушения клеток (они описаны в разд. 2.2). Такое обычное лабораторное оборудование, как весы, рН-метр, мешалки, аппараты для производства льда, необходимы при очистке ферментов так же, как и при использовании любой другой биохимической методики. Измерение объемов можно производить с помощью градуированных цилиндров (а в редких случаях, если необходима большая точность, мерных колб), пипеток и (для малых объемов) микро-литровых шприцев. При анализе ферментов часто требуется отмерить очень малый объем исследуемого раствора, например менее 1 мкл. Современные шприцы позволяют осуществлять добавление таких объемов с достаточной точностью. Желательно иметь шприцы объемом от 0,5 до 250 мкл. Кроме того, очень удобны регулируемые пипетки типа Eppendorf с набором наконечников объемом от 5 мкл до 5 мл. [c.12] Электрофоретический анализ смеси белков проводят с помощью гель-электрофореза или изоэлектрического фокусирования, чаще всего в полиакриламидном геле с додецилсульфатом в качестве денатурирующего агента или без него. Методика описывается в разд. 9.1. В настоящее время в продаже имеется много прекрасного оборудования начинающим можно посоветовать сразу же приобрести прибор для тонкослойного электрофореза. Пожалуй, сейчас в мире мало найдется биохимических лабораторий, в которых не было бы оборудования для аналитического гель-электрофореза. [c.12] Вернуться к основной статье