ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разделение белков путем осаждения из "Методы очистки белков" На ранних этапах становления белковой химии единственным применяемым на практике способом разделения белков различных типов было осаждение части белковой смеси за счет изменения некоторых свойств растворителя. Далее осадки отфильтровывали и растворяли в исходном растворителе. И до сих пор эти процедуры. занимают важное место в процессе очистки белков, однако теперь в большинстве случаев фильтрация заменяется центрифугированием. Белковые осадки представляют собой достаточно крупные агрегаты белковых молекул, так что их можно отцентрифугировать при относительно низкой центробежной силе. В некоторых случаях агрегация идет дальше и осадок флоккулирует, тем не менее размеры агрегатов обычно остаются небольшими вследствие движений и столкновений частиц суспензии. Это приводит к засорению бумажных фильтров, и возникает необходимость в центрифугировании при существенно более высоких ускорениях чем 1 д. Различные способы получения осадка описаны ниже в отдельном разделе. [c.56] Первоначально белки классифицировали в зависимости от их растворимости, и, хотя сейчас эта классификация в основном уже забыта, соответствующие названия до сих пор используют, когда речь идет о сывороточном альбумине или иммуноглобулинах. Глобулинами называли белки, нерастворимые при низких концентрациях соли в растворе сывороточные глобулины можно осадить, просто разводя сыворотку водой, при этом альбумины остаются в растворе. Поведение глобулинов — пример изоэлектрического осаждения белков в области всалива-ния (разд. 3.2). Однако эта классификация порождает путаницу, так как некоторые белки нерастворимы при pH 6, на растворимы при pH 8 и более низкой концентрации соли. Тем не менее существуют белки, которые по своим свойствам полностью соответствуют глобулинам. Это обычно белки с низкой растворимостью в водной среде, несущие на своей поверхности значительное число гидрофобных аминокислотных остатков. И наоборот, есть много истинных альбуминов, хорошо растворимых в воде и характеризующихся низкой гидрофобностью. [c.56] Распределение гидрофильных и гидрофобных остатков на поверхности белковой молекулы является признаком, определяющим растворимость белка в различных растворителях. Хотя гидрофобные группы стремятся сконцентрироваться внутри белковой молекулы, значительная их часть располагается на поверхности и контактирует с растворителем (рис. 3.1). Гидрофобным группам на поверхности молекул наряду с заряженными и другими полярными группами принадлежит важная роль в определении поведения белков. Основным компонентом растворителей всегда является вода, хотя есть основания предполагать, что, например, интегральные мембранные белки можно было бы выделять, используя неводные растворители. Для изменения растворимости белка можно манипулировать свойствами воды как растворителя, изменяя ионную силу, pH, количество добавляемых, смешивающихся с 50Д0Й, органических растворителей и других инертных веществ или полимеров, а также комбинируя эти изменения с изменениями- температуры. Чаще всего для селективного осаждения белков используют нейтральные соли. Это и будет предметом обсуждения двух следующих разделов. [c.57] Вернуться к основной статье