ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Проблемы выделения и идентификации рецепторов из "Введение в молекулярную эндокринологию" В результате связывания с ферментом химическая структура вещества мол ет изменяться (каталитическая реакция). Связывание с рецептором не приводит к изменению структуры вещества. Перечисленные особенности лел ат в основе существующих ныне методов изучения взаимодействия веществ с рецепторами. [c.133] Поскольку концентрация рецепторов в клетке низка, в подавляющем большинстве случаев такое исследование проводят с веществами, меченными радиоактивными изотопами. Если концентрация такого вещества увеличивается, то количество связанной радиоактивности будет возрастать. При низких концентрациях вещества происходит как специфическое, так и неспецифическое связывание. При определенных концентрациях вещества достигается насыщение всех специфических участков, после чего увеличение концентрации вещества будет приводить к росту только неспецифической сорбции, т. е. станет прямо пропорциональным концентрации исследуемого вещества (см. рис. 50). Экстраполировав этот линейный участок связывания в область низких концентраций вещества, мы можем определить, какая доля в общем связывании принадлежит специфическому и неспециф ическому связыванию. [c.133] Следует отметить, что эти методические приемы (а лучших, к сожалению, в настоящее время нет) в ряде случаев могут ввести экспериментатора в заблуждение. Так, например, данный метод применим только в том случае, если нативное и меченное изотопом вещество связываются одинаково (причем, не только со специфическими, но и с неспецифическими уча.стками). Это не всегда так. Например, включение в молекулу инсулина изотопа изменяет сорбционные свойства белковой молекулы, в результате чего специфические участки связывания инсулина можно обнаружить даже в таком материале, в котором исключено наличие ре-цепторов или других биологических структур (в стекле, тальке, бумаге). [c.134] При выборе лиганда необходимо учитывать, сколько радиоактивного изотопа может быть включено в его молекулу без нарушения сродства к рецептору. Поскольку количество рецепторов в биологическом материале низко, а сродство к гормонам высоко, используемый лиганд дол кен иметь высокую удельную радиоактивность (выше 10 Ки/ммоль). Очевидно, что при использовании в качестве изотопа более подходяи им лигандом является алпренолол, который имеет ненасы-ш,енную двойную связь в участке, несущественном для связывания с рецептором, чем пропранолол, который имеет такую же избирательность в отношении р-рецеп-торов и такое же сродство к ним, но может включить в свою молекулу меньшее количество радиоактивной метки (см. рис. 42). [c.139] Весьма эффективным инструментом в изучении рецепторов является метод слияния разных клеток. Это достигается либо с помощью вируса Сендая 7 либо с помощью химических агентов (например, полиэтилен-гликоля), вызывающих слияние плазматических мембран разных клеток с образованием одной клетки из нескольких. [c.141] Слияние клеток, некомпетентных в отношении стероидных гормонов, с клетками, имеющими рецепторы стероидов, позволяет получить гибрид , отвечающий на стероидные гормоны синтезом новых, ранее не синтезировавшихся, белков (рис. 57). [c.141] Около 5% от веса рецептора составляют углеводы. В их числе манноза, глюкоза, глюкозамин, Н-ацетил-глюкозамин, М-ацетилгалактозамин и, возможно, галактоза. Сахара обнаружены в составе веех, субъединиц холинергического рецептора. [c.144] Другие мембранные рецепторы также, по-видимому, являются гликопротеидами. Об этом свидетельствуют данные -о потере гормонсвязывающих свойств или исчезновении биологических эффектов гормонов и нейро-]медиаторов после обработки мембрац- ферментами, отщепляющими -углеводные остатки от белков. [c.144] Вернуться к основной статье