ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Подсчет раковых клеток (эксфолиативная цитология) из "Мембранная фильтрация" В силу технических особенностей подсчета асбестовых волокон, а также того, какое внимание уделяется этому подсчету со стороны правительства, НИОТЗ опубликовал весьма подробное описание предписываемого ею метода подсчета. Метод счета, описанный выше, представлен нами в сильно сокращенном виде как пример практического использования мембранных фильтров для прямого микроскопического счета в небиологической области. Многие из принципов, установленных стандартом НИОТЗ и отмеченных здесь, могут принести пользу в многочисленных случаях применения микроскопического счета. [c.231] Можно применять как мембраны Нуклепор, так и традиционные мембранные фильтры. Некоторые исследователи считают, что следует отдавать предпочтение ацетилцеллюлозным мембранам, поскольку они задерживают меньше краски, чем нитроцеллюлозные, однако использование мембран из смешанных эфиров с преобладанием нитроцеллюлозы также было небезуспешным. Мембраны Нуклепор не задерживают краску, но их поры остаются видимыми в подготовленном образце, что может вызывать раздражение у некоторых исследователей. Прежде чем применять мембраны из эфиров целлюлозы, им надо дать предварительно набухнуть, погрузив их в 95 %-ный этанол на 10—15 секунд. Такая обработка помогает уменьшить образование на мембранах складок и морщин в процессе приготовления образца. Мембраны Нуклепор не нуждаются в предварительном набухании, но их следует увлажнить в физиологическом растворе. Незначительная шероховатость мембран из эфиров целлюлозы может способствовать адгезии клеток в процессе их окрашивания, что ведет к более полному их выделению. [c.232] Процедура окрашивания представляет собой модифицированную процедуру с использованием гемотоксилина, подобную той, что нашла применение в обычной клинической цитологии. После того как клетки окрашены и должным образом обесцвечены, мембрана обезвоживается в абсолютном этаноле. Существенно, чтобы вся вода была удалена на этой стадии, иначе на следующей стадии мембрану не удастся сделать достаточно прозрачной. Чтобы мембрану сделать прозрачной, ее помещают в ксилол, а затем в раствор для заключения препаратов. Фирма Миллипор продает прямоугольные мембраны, которые без разрезания устанавливаются непосредственно на предметном стекле микроскопа. После этого мембрана накрывается покровным стеклом и высушивается в течение 15—20 мин при температуре 50 °С. [c.233] В случае использования мембран Нуклепор их необходимо растворять в хлороформе, так как их нельзя сделать достаточно прозрачными. После того как клетки на мембране окрасились, ее помещают на сухое предметное стекло той стороной, на которой находятся клетки, и промакивают досуха. Стекло надписывают и вместе с мембраной кладут на абсорбирующую пористую подложку в чашку Петри, после чего всю поверхность мембраны равномерно заливают хлороформом. Мембрана растворяется, а задержанные ею клетки прилипают к предметному стеклу, после чего их вместе с предметным стеклом погружают в ксилол и затем помещают в жидкость для заключения препаратов. [c.233] Вернуться к основной статье