ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов из "Мембранная фильтрация" Использование мембранных фильтров для подсчета микроорганизмов подробно рассматривали Даубнер и Петер [57], а также Американская ассоциация здравоохранения (АРНА) [3]. Применение того или иного конкретного метода подсчета в значительной степени определяется тем, какой вид микроорганизмов подсчитывается. [c.240] При проведении рутинных анализов воды в тех случаях, когда содержание микробов невелико и практически не меняется от пробы к пробе, для большой серии проб можно пользоваться одним и тем же фильтродержателем, но между каждой пробой фильтровальную воронку необходимо промывать 20—30 миллилитрами стерильной воды. При работе же с неизвестными пробами, а также с пробами, сильно отличающимися друг от друга содержанием микроорганизмов, для каждой пробы должен использоваться свежестерилизованный фильтродержатель. Быструю повторную стерилизацию можно осуществить с помощью ультрафиолетового стерилизатора (достаточно двух минут обработки), текучим паром, кипячением или промывкой метанолом или этанолом с последующим их воспламенением. [c.243] После соответствующей инкубации колонии, выросшие на мембране (рис. 9.2,6), подсчитывают с помощью подходящего метода. В большинстве случаев эти колонии можно подсчитать-невооруженным глазом, но лупа с небольшим увеличением не будет лишней. Некоторые используют стереомикроскоп, однако это имеет смысл лишь в случае очень небольших колоний. Счет можно облегчить, регулируя подсветку, а контрастность, может быть изменена применением черных мембран или красителей, которые включаются в колонии во время их роста. Необходимо быть уверенным в том, что такие красители не тормозят рост подсчитываемых микроорганизмов. Если для особой цели используют дифференциальную среду, подсчитываются только те колонии, которые обладают характерной окраской или блеском. [c.244] Увеличение контрастности. Если нужно увеличить контрастность, то мембранный фильтр, содержащий колонии, может быть окрашен перед счетом соответствующим красителем. Мал-вэни [155] описывает два способа окраски один, когда окрашивают мембрану, чтобы сделать ее контрастной по отношению к колониям, и другой, когда окрашивают колонии, чтобы сделать их контрастными по отношению к мембране. Для окрашивания мембраны используют оксалат малахитового зеленого-в виде 0,01 %-ного водного раствора. Поверхность мембраны, находящейся еще в инкубационной чашке, осторожно заливают 2—4 миллилитрами раствора красителя, который через 8— 10 секунд сливают. При этом способе окраски колонии выглядят белыми или желтыми на фоне зеленой мембраны. Чтобы окрасить колонии, используют метиленовый голубой раствор 3 г метиленового голубого, растворенного в 300 мл этанола, смешивают с 1 л 0,01 %-ного раствора гидроокиси калия. Около 2 мл этого красящего раствора используют для пропитки абсорбирующей бумажной подложки, после чего на нее кладут мембрану, содержащую колонии. Через 15 минут колонии выглядят тёмно-голубыми на фоне более слабоокрашенной мембраны. Любой из этих способов может оказаться полезным,, когда колонии, подлежащие счету, очень малы. [c.244] Мембраны, содержащие колонии, могут быть высушены и храниться в течение многих лет в качестве контрольных образцов. Для этого мембрану берут из чашки и кладут на кусок сухого картона. После такого высушивания ее можно положить в целлофановый конверт, который помещается в рабочий журнал. Хотя эта мембрана, очевидно, не то же самое, что свежая, хранение контрольных образцов может оказаться полезным в целях повторного контроля. [c.247] Вернуться к основной статье