ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Конструирование ДНК-дуплексов из частично комплементарных полинуклеотидов из "Генетическая инженерия" Альтернативный методу Кораны способ конструирования искусственных протяженных фрагментов ДНК сформулирован в работе К. Итакуры с сотрудниками. В его основе лежит способность некоторых ферментов, в частности фрагмента Кленова ДНК-полимеразы I, достраивать комплементарную цепь в присутствии праймера. Это свойство фермента эпизодически использовалось в рамках метода Кораны для удлинения олигонуклеотидов, в более поздних работах — для получения ДНК-дуплексов. [c.72] Впервые этот подход был использован для синтеза ДНК, кодирующей С-концевую область человеческого интерферона а2. По аналогичной схеме был получен ген эглина С (рис. 1.54). [c.72] Рассматриваемый метод требует меньшего числа полинуклеотидов, чем метод Кораны, вследствие чего на 30-40 % снижаются затраты на химический синтез и анализ олигомеров. В этом методе значительно меньше стадий, поэтому он не столь трудоемок и, по-видимом , более надежен по сравнению с методом Кораны. Кроме того, при использовании полинуклеотидов длиной до 40 нуклеотидных звеньев нет необходимости в компьютерном анализе. Вероятно, это связано с достаточной стабильностью образующихся комплексов из-за большей длины области комплементарного взаимодействия полимеров и способности ДНК-полимеразы проходить низкоэнергетические шпильки. [c.72] Схема конструирования гена человеческого интерлейкина 2 с применением векторов серии pFH приведена на рис. 1.56. [c.74] Вернуться к основной статье