ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Молекулярные векторы на основе плазмид группы несовместимости из "Генетическая инженерия" Ферментный аппарат репликации плазмид группы In Q характеризуется значительной автономностью, что обусловливает чрезвычайно широкий круг хозяев данных плазмид среди грамотрицательных бактерий. [c.216] Таким образом, в качестве селективного маркера при встройке фрагментов ДНК в плазмиду RSF1010 может выступать лишь ген sul, однако многие виды бактерий относительно нечувствительны к сульфаниламидам, и поэтому данный генетический маркер имеет ограниченное применение при создании молекулярных векторов для широкого круга хозяев. Попытки преодолеть данное затруднение путем создания векторов на основе репликона RSF1010 и разных детерминант устойчивости к антибиотикам были предприняты в ряде лабораторий. [c.216] Необходимо отметить, что ген устойчивости к стрептомицину в рассмотренных плазмидах транскрибируется с промоторов, локализованных во встроенных Р Й-фрагментах различного происхождения. [c.217] При конструировании гибридных ДНК in vitro содержание целевых молекул в смеси, полученной после лигазной реакции, невелико. Поэтому для введения этих молекул в бактерии и их амплификации необходима система с высокой эффективностью трансформации и отбора гибридов. Более всего для этого подходит Е. соИ. После выявления и подробного анализа целевых гибридных молекул ДНК, полученных на основе векторов широкого круга хозяев, их можно из клеток Е. oli конъюгационно переносить (мобилизовать) практически в любой вид грамотрицательных бактерий и изучать экспрессию клонированных генов в новом генетическом (биохимическом) окружении. Для такого переноса плазмида-помощник (чаще всего группы In P) должна находиться в той же клетке, в которую введена гибридная молекула ДНК на основе In Q-репликона, содержащая необходимые для мобилизации генетические детерминанты mob и опТ. [c.219] Уже первые генно-инженерные эксперименты показали, что один и тот же ген в грамотри-цательных бактериях, относящихся к разным семействам, родам и даже к разным видам одного рода, может обусловливать значительно различающийся уровень синтеза кодируемого им белка. Причины этого чаще всего не ясны. Учитывая эти результаты, В. Г. Дебабов с сотрудниками предложили следующую схему исследований целевой ген встраивается в экспрессирующий вектор с широким кругом хозяев и полученная гибридная плазмида затем конъюгационно переносится в большое число штаммов разных грамотрицательных бактерий. Созданные таким образом гибридные штаммы сравнивают по уровню продукции целевого белка и выбирают наилучший вариант. [c.222] Примечание. Бактерии сгруппированы по признаку гомологии 58 РНК. Активность не выявляется. [c.224] Это выгодно отличает ее от других генно-ин-женерных систем с регулируемой экспрессией целевых генов. [c.224] Вернуться к основной статье