ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Перенос генов в растения с помощью вирусов из "Генетическая инженерия" Подавляющее большинство вирусов растений являются вирусами с одноцепочечной РНК и реплицируются в цитоплазме клетки. Вирусы в растениях накапливаются до высоких концентраций, поэтому заманчиво использовать их в качестве многокопийных экспрессирующих векторов. При этом генно-инженерные манипуляции по встройке целевых последовательностей в вирусный геном осуществляют на клонированных в бактериальных плазмидах ДНК-ко-пиях вирусных РНК. ДНК-копию в плазмиде встраивают между промотором и терминатором транскрипции фага (например Т7). С помощью фаговой РНК-полимеразы in vitro синтезируют РНК-транскрипты гибридных ДНК и трансфицируют ими протопласты или ткани растения. [c.475] Высокий уровень экспрессии встроенного гена, быстрая аккумуляция значительных количеств чужеродного белка и вследствие этого простота его очистки делают вирусы растений привлекательными векторами для переноса генов. Вирусы растений имеют более широкий круг хозяев, чем агробактерии, что позволяет экспрессировать ген в разных видах растений с помощью одной и той же векторной конструкции. Кроме того, если антиген многократно экспонирован на поверхности вирусных частиц, его иммуногенность с)Ш] ественно повышается. В качестве носителей для антигенных пептидов используют белки оболочки вирусов табачной мозаики, мозаики коровьего гороха, мозаики вигны китайской, мозаики люцерны и некоторых других вирусов. [c.475] Наиболее хорошо изучены вирусы табачной мозаики и мозаики коровьего гороха. [c.475] В вирусных частицах одна полноразмерная молекула РНК одевается 2130 молекулами белка оболочки (см. рис. 19.10, б), и образуются палочковидные вирионы длиной 300 нм. Структура белка оболочки TMV была подробно изучена, что позволило плаитровать и осуществлять эксперименты по встройке в его состав чужеродных последовательностей. [c.475] Данную проблему решили в 1993 г. X. Хама-мото с соавторами, которые предложили использовать природную стратегию синтеза двух полипептидов РНК-полимеразы вируса табачной мозаики. Авторы создали векторную конструкцию, в которой после стоп-кодона гена СР ввели последовательность из шести нуклеотидов, обеспечивающую прочтение этого кодона как значащего. Далее в совпадающей рамке трансляции встроили последовательность, кодирующую пептид длиной 12 АК — ингибитор фермента, конвертирующего ангиотензин-1. При введении гибридной РНК TMV в клетки растений наблюдался синтез как немодифици-рованного СР, так и его химерной формы. После сборки вирусные частицы содержали в своем составе около 5 % химерных молекул СР (см. рис. 19.10, б). Продуктивность в листьях табака или томатов в пересчете на химерный белок при этом достигала 100 мкг/г сырого веса. [c.477] Вернуться к основной статье