Фазово-контрастный метод

Рис. 4-10 Фибробласт в культуре ткани при наблюдении с помощью четырех различных типов световой микроскопии. А. Изображение получено при прямом прохождении лучей через клетку (микроскопия в светлом поле). Остальные изображения получены с помощью методов, рассматриваемых в тексте Б-фазово-контрастная микроскопия В -интерференционная микроскопия /" микроскопия в темном поле Простая замена

Метод фазового контраста основан на том, что показатели преломления отдельных участков структуры и окружающей среды различны, вследствие чего световая волна, прошедшая сквозь структуру препарата, претерпевает изменение по фазе и приобретает так называемый фазовый рельеф. Глаз человека и фотографическая пластинка воспринимают только изменения амплитуды и нечувствительны к изменениям фазы световой волны. Поэтому фазовые изменения световой волны, прошедшей через препарат, с помощью специального оптического устройства преобразуются в изменения амплитуд, что приводит к ослаблению или усилению интенсивности света, прошедшего через объект (т. е. фазовый рельеф волны заменяется амплитудным рельефом). В результате получается видимое фазово-контрастное изображение структуры препарата, в котором распределение яркостей соответствует фазовому релье- [c.36]

На рис. 36 показаны поперечные срезы полинозного волокна, полученные с применением обычного метода (а), при помощи фазово-контрастного устройства КФ-4 (б) и фазово-темнопольного устройства МФА-2 (в). [c.39]

Микрофотографии фибробласта мыши, полученные методом светлого поля (Л) и фазово-контрастным методом (Б). Обратите внимание на существенно лучший контраст на снимке Б. [c.44]

Создание фазово-контрастного метода, изобретение фазово-контрастного микроскопа [c.778]

Для фазово-контрастного метода или интерференционной микроскопии, а также для важных исследований при больших увеличениях могут потребоваться срезы толщиной в несколько микронов. Получение серий срезов такой толщины требует плотной пропитывающей матрицы, обладающей хорошей адгезией к образцу, и должно осуществляться механическими микротомами. Парафин, хотя его и часто используют, не вполне удовлетворителен. [c.255]

Сравнительная оценка модификации с применением фазово-контрастной микроскопии и метода А. С. Разумова при определении общего числа микроорганизмов в одних и тех же пробах воды Горьковского водохранилища показала довольно близкие результаты. Однако общее число бактерий, определяемое методом фазовоконтрастной микроскопии, выше (в среднем на 15%), чем полученное прямым счетом с окрашиванием. [c.85]

Фазово-контрастный метод основан на том, что различные участки прозрачного препарата отличаются друг от друга по показателю преломления. В результате происходит смещение [c.7]

Отличительной чертой интерференционных методов оптического контроля является взаимодействие двух потоков света. К интерференционным методам относятся интерферометрический, дифракционный, фазово-контрастный, рефрактометрический и голографический. Они основаны на изменений энергии и фазы вторичных потоков после взаимодействия с контролируемым объектом, его элементами или частями. Поскольку величиной, определяющей набег фазы, является длина волны, интерференционные методы обеспечивают измерения и контроль параметров объектов до долей длины волны. Обычно погрешность или разрешающая способность такого рода аппаратуры составляет 0,1 X. В связи с высокой разрешающей способностью и чувствительностью этих методов большое внимание должно быть уделено неизменности условий контроля, в том числе и параметров окружающей среды. Например, наличие на пути одного из световых потоков газа с переменными оптическими [c.262]

В микробиологических лабораториях применяются не только обычные методы оптической микроскопии в проходящем свете, но и специальные в темном поле зрения, фазово-контрастный, люминесцентный и электронный. [c.8]

Детальное изучение монокристаллов полимеров проводится почти исключительно методами электронной микроскопии и электронографии. Полезными дополнениями к ним служат фазово-контрастная оптическая микроскопия и метод рассеяния рентгеновских лучей под малыми углами, но они не дают нужного разрешения, обеспечивающего возможность критического анализа. Электронная микроскопия полимерных кристаллов в общем не имеет специфических трудностей, однако тем не менее возникает неизбежное неудобство, так как кристаллы готовят путем высушивания на подложках и они не всегда имеют свою первоначальную форму роста. Существуют, как мы вскоре увидим, достаточные основания считать, что высушивание приводит во многих случаях к серьезным последствиям и что кристаллы [c.433]

Применение. В фазово-контрастной микроскопии для наклеивания срезов по методу Белла [1]. [c.297]

Наряду с этими данными имеются сообщения о неплоскостной форме пластинчатых кристаллов. Некоторые авторы утверждают, что простейший монослойный кристалл полиэтилена в естественных условиях имеет форму полой пирамиды. При высыхании (которое необходимо для исследования образцов в электронном микроскопе) кристаллы становятся плоскими. Действительно, при исследовании монокристаллов полиэтилена непосредственно в суспензии методом фазово-контрастной микроскопии были получены представления о пирамидальной форме кристаллов полиэтилена [c.64]

Методика предназначена для определения размера частиц каучуковой фазы на разных стадиях полимеризации методом фазово-контрастной микроскопии. [c.60]

Сталлами. Однако это ограничение редко встречается в работе с полимерными материалами. Система двух диафрагм имеет одно существенное преимущество перед методом центрального освещения. Оно состоит в том, что в первом методе соответствие между образцом и иммерсионной жидкостью устанавливается при резкой наводке на образец, тогда как во втором случае для наблюдения линии Бекке микроскоп приходится выводить из фокуса. Это не только увеличивает чувствительность сравнения, но и позволяет проводить тонкие исследования локальных изменений показателя преломления в образце. Благодаря этому метод двойного диафрагмирования дает возможность различать отдельные детали образца на основании небольших изменений показателя преломления. В этом методе микроскоп работает по принципу фазово-контрастного микроскопа, который улучшает видимость частиц, немного отличающихся от окружающей их среды только показателем преломления или толщиной. Для некоторых исследований метод двойной диафрагмы может превосходить метод фазового контраста. Промышленные фазово-контрастные микроскопы дают чрезвычайно контрастные изображения с ярким ореолом вокруг частиц, отличающихся от окружающей их среды. Ореол и крайняя степень контрастности изображения уменьшают число наблюдаемых деталей, тогда как метод косого освещения с двойной диафрагмой дает более мягкое изображение с большим числом деталей. Последний метод особенно удобен для исследования волокон или стержневидных образцов, которые легко расположить под определенным углом к щели между диафрагмами. Метод двух диафрагм осуществляли как с петрографическим, так и со сложным светлопольным микроскопом. Точная юстировка диафрагм возможна почти для всех сложных микроскопов. [c.264]

Для преодоления других, обосновавшихся в учении о фотосинтезе неправильных представлений, также понадобилась напряженная работа коллективов ученых различных стран. Успеху исследований способствовало широкое использование великих завоеваний физики и химии нашего времени и созданных на основе этих успехов новых, высокоэффективных методов исследования. В числе этих методов спектрометрия, включая импульсную, дифференциальную, а также флуоресцентную спектрофотомет-рию, электрометрия, включая и измерения фотопроводимости, магнитные измерения, меченые атомы, дифференциальное центрифугирование, электронная, фазово-контрастная микроскопия и др. Полученные в ходе исследований материалы легли в основу современных представлений о фотосинтезе как о сенсибилизируемой хлорофиллом системе сопряженных окислительно-восстановительных реакций. Специфика фотосинтеза состоит в том, что в ходе этого процесса имеет место превращение электромагнитной энергии света в энергию химических связей конечных фотопродуктов. [c.145]

При микроскопии препаратов живых культур используют очень полезный информативный метод типа висячая капля . Так называется препарат, когда капля с культурой свисает с покровного стекла в лунку, сделанную в толстой пластинке из прозрачной пластмассы (разд. 3.2.3). При этом бактерии находятся в ростовой среде, располагаясь в плоскости, прилежащей к покровному стеклу. Поскольку обычно их берут из колонии в виде отдельных клеток, естественное взаиморасположение клеток не сохраняется, а из-за толщины подвешенного материала и возникающих оптических трудностей разрешение невелико. Несмотря на эти ограничения, данный метод можно использовать для прослеживания действия токсичных химических агентов и антибиотиков на рост клеток и их форму. Если необходимы длительные наблюдения в более оптимальных для микроскопии условиях, исследуют культуры, находящиеся на предметном стекле, а не препараты типа висячая капля при этом их можно сделать достаточно тонкими и эффективно изучать, используя соответствующую оптику. Лучше всего применять фазово-контрастную микроскопию, но в большинстве случаев анализ можно проводить и с помощью обычной оптики. [c.46]

Казалось бы естественным изучение фазового состава основывать главным образом на исследовании микроструктуры смеси полимеров. Прямое исследование микроструктуры в световом (фазово-контрастном) или электронном микроскопе при современных методах подготовки образцов дает интересную информацию о структуре смеси [2, 3, 77, 78, 80, 84, 85, 88—90, 155 165 и др.]. Этот метод дает также информацию, которую вообще нельзя получить другими методами. Но метод имеет и свои недостатки, самый основной из которых обусловлен высокомолекулярной природой полимеров. Если в смеси полимеров размер частиц дисперсной фазы составляет, например, 100— 150 А, то это могут быть либо действительно частицы второй фазы, либо такие микронеоднородности, которые свойствами фазы не обладают. Действительно, одна макромолекула, свернутая на себя, имеет размер указанного порядка. Если полимеры совместимы и произошло диспергирование до отдельных макромолекул, то под микроскопом такие макромолекулы могут выглядеть как частицы второй фазы, даже если произошло самопроизвольное растворение одного полимера в другом. В истинных растворах низкомолекулярных веществ обычно происходит ассоциация однородных молекул. Если макромолекулы образуют ассоциат еще до возникновения новой фазы, то он может иметь размеры обычных коллоидных-частиц. Поэтому наличие микронеоднородности, видимой в микроскоп, не есть еще однозначное подтверждение наличия двухфазной структуры система двухфазна тогда, когда свойства частички идентичны свойствам большого объема материала дисперсной фазы. В сущности такой подход следует из определения Гиббса. Так, в книге Киреева ([166], стр. 232) сказано Фаза — совокупность всех гомогенных частей системы, одинаковых по составу и по всем химическим и физическим свойствам (не зависящим от количества вещества) и отграниченных от других частей системы некоторой поверхностью (поверхностью раздела) . [c.35]

Первые сведения об общей организации и тонкой структуре клетки были получены с помощью оптических методов. По мере совершенствования оптических приборов и улучшения техники микроскопирования росли и наши знания о микроморфологии клетки и ее отдельных компонентов. Дальнейшее развитие световой микроскопии, а также ультрафиолетовой и электронной микроскопии позволило существенно повысить разрешающую способность оптических приборов темнопольная и фазово контрастная микроскопия облегчила наблюдение живой клетки. Несомненно, и поныне микроскопия, особенно электронная, в сочетании %о сложной предварительной обработкой биологического материала остается важнейшим методом исследования. Для получения дополнительных сведений о молекулярном уровне приходится прибегать к косвенным физическим и химическим методам, с помощью которых стало возможным вьщелять и исследовать отдельные клеточные компоненТ1Е% [c.22]

Очень чувствительным методом оптического неразрушающего контроля является фазовый. Он заключается в фиксации фазы прошедшего или отраженного излучения и сопоставлении сдвига фазы относительно первоначальной. При этом изменение фазы отраженного или прошедшего излучения преобразуется в распределение интенсивности при помощи фазовых пластинок (фазово-контрастный метод Цернике) [ИЗ]. [c.100]

О том, протекает ли сшивание в системе, можно судить с помощью фазовой контрастной или электронной микроскопии, ИК- и ЯМР-спектроскопии, а также по изменению температуры стеклования при динамических воздействиях. Наиболее широко используются методы релаксационной спектроскопии и феноменологическое уравнение Муни-Ривлина, в котором вторая константа ассоциируется с величиной неидеальности эластомера и его вулканизатов. Эластическую константу Муни-Ривлина С] определяют по уравнению Флори-Ренера (по данным набухания вулканизатов в растворителях) [c.503]

Вблизи ядра дислокации обычно наблюдается скопление примесей ( облако Коттрелла ). Иногда примесей скапливается такое количество, что они выделяются как самостоятельная фаза в виде коллоидных частиц. Это может быть обнаружено даже просто в проходящем свете под микроскопом. Обычно же требуются более сложные методы наблюдения, чаще всего фазово-контрастная микроскопия (см. Физический энциклопедический словарь — ФЭС, 1962—1966 гг.). [c.7]

Для смесей полимеров, по-видимому, весьма характерна и специфическая двухфазная структура, в которой обе фазы непрерывны. Впервые на возможность возникновения таких структур указывали Роватти и Бобалек [77]. Они пришли к выводу, что наибольшая прочность и сопротивление удару смеси ПВХ и бутадиен-нитриль-ного каучука достигается тогда, когда обе фазы полимеров непрерывны и образуют волокнистое переплетение. Аналогичное наблюдение сделал и Мацуо [2, 3, 78] в отношение смеси ПВХ с сополимером бутадиен-нитрильного каучука и 20% нитрила акриловой кислоты. Методом фазово-контрастной микроскопии было обнаружено, что в смесях бутилкаучука со СКЭПТ или с полихлоропреном при соотношении компонентов близких к 1 1 возникают сетчатые структуры в виде контактирующих частиц шириной 2—4 и длиной несколько микрон [79]. Авторами работ [62, 80, 81] обнаружены сетчатые структуры двух непрерывных фаз в смесях полиэтилена высокой плотности и полипропилена. Свойства каучуков, усиленных термореактивными смолами, объясняют возникновением непрерывной структуры смолы в матрице каучука [82]. Имеются и другие работы [117], в которых прямо или косвенно было установлено наличие двух взаимопроникающих сеток каучуков, образующих смесь. [c.26]

Было также установлено, что толш ина кристаллов линейного полиэтилена в виде плоских пластинок, выращенных из разбавленных растворов при температуре около 80 °С, составляет величину порядка 100 А. Изменяя условия кристаллизации (температуру, концентрацию полимера в растворе, природу растворителя и т. п.), можно получить различные морфологические формы кристаллов [7]. Как правило, эти морфологические структуры не имеют форму плоских пластинок, как это видно из наблюдений их объемной конфигурации с помощью метода фазово-контрастной микроскопии [8]. Кроме того, при кристаллизации в идентичных условиях образуются различные (хотя и в чем-то сходные) морфологические структуры. Примеры таких кристаллических образований показаны на рис. П1.8— [c.170]

Модификация метода прямого подсчета с применением фазово-контрастной микроскопии. А. Г. Кокина (1956), А. С. Разумов, Л. Е, Корш (I962), Ri hards, КгаЬек (1954) использовали фазово-контрастную микроскопию для подсчета общего числа бактерий, предварительно сконцентрированных на мембранном фильтре. После высушивания мембранного фильтра (без окрашивания) готовят препарат и просчитывают бактерии под микроскопом с помощью фазово-контрастного устройства. При подсчете бактерий используют зеленый светофильтр, благодаря которому получается поле зрения спокойного зеленого цвета. Бактерии на зеленом поле выглядят довольно контрастно, как черные точки или палочки различных размеров. [c.85]

Красители я контрастирующие вещества. Многие детали исследуемых объектов трудно или вовсе не различимы в поЛе зрения микроскопа и не столько по причине недостаточной разрешающей способности прибора, сколько вследствие недостаточной контрастности изображения объекта. Это привело к тому, что уже в прошлом веке, когда еще не были известны методы фазово-контрастной микроскопии, для усиления контрастности изображения стали применять кармин 1849 г.),"гематоксилин (1865 г.), эозин, метиленовый голубой (1875 г.) и другие красители. Число красителей, пpи ieняeмыx в микроскопии для указанной цели, достигает в настоящее время 200 наименований. К, этой группе химических препаратов относятся также витальные красители и флуо-рохромы. Сюда же должны быть отнесены вещества, применяемые в, электронной микроскопии качестве красителей для контрастирозання. [c.3]

А fio]. Для контроля поверхностей подложек также используются такие методы оптической микроскопии, как светоразделительная микроскопия, многолучевая интерференция и фазово-контрастная микроскопия (интерференция с использованием поляризованного света и двулучепреломляющей призмы). В этих методах для измерения толщины использованы принципы, описанные в гл. 1. В отличие от наблюдения колец на ступеньке пленкн, в них рассматривается вся подложка, в силу чего интерференционные кольца образуют контурную карту поверхности. [c.507]

Метод фазового контраста служит для получения контрастных изображений прозрачных и бесцветных объектов, невидимых при обычных методах микроскопии. Темные и светлые места в фазово-контрастном изобралсении соответствуют различию в показателе преломления или толщине. [c.61]

Наибольшее распространение количественный микроанализ методом Кофлера получил в фармации для определения состава твердых двойных лекарственных смесей. Для термомикроскопических исследований и, в частности, для работы методом Кофлера специально предназначен микроскоп ТНЕКМОРАЫ МТ М НТ-1 (фирма Рейхерт, Австрия). В число принадлежностей к прибору входят фазово-контрастное приспособление и кофлеровский набор эталонных стеклянных порошков, [c.284]

Кроме того, разница в показателях преломления мономера и полимера была использована для получения фазовой контрастной фотомикрографии. Замедленная киносъемка была проведена также при освещении по методу темного поля и ярко продемонстрировала нуклеотивный процесс. [c.407]

Беннет и сотр. [15] составили обзор, посвященный технологическому применению фазово-контрастного микроскопа к ряду материалов. Так, например, прозрачные пластики можно исследовать на неоднородность и на содержание примесей. В листовых материалах этим методом удается идентифицировать волокна и другие наполнители. Покрытия можно изучать в виде поперечных срезов или тонких пленок. Для исследования поверх-1Юстей применяют метод отпечатков некоторые поверхности, обладающие достаточно высокой отражательной способностью, можно изучать с помощью фазово-контрастного вертикального освещения. Метод фазового контраста позволяет определять характеристики бумажных волокон, отсутствие в них лигнина и других примесей. Реймут [200] указал ряд применений этого метода в текстильной промышленности. К их числу относятся наблюдения за бактериальным и ферментативным разложением шерсти, исследования деталей поперечных срезов шерсти, бактерий и плесени в волокнах, частиц, включенных в волокна, и изломов волокон, возникающих при стирке и глажении ткани. Ройер и Мареш [209] сообщили о результатах исследования поперечных срезов искусственного волокна и тонких пленок на тканях, целлюлозных волокнах и коже. Можно также изучать животные волокна со слабой пигментацией. С пигментированных волокон можно снять отпечатки [90, 264]. Фазово-контрастная оптика позволяет хорошо 5азличать структуру набухших волокон [49]. [c.247]

Методы окрашивания могут быть теми же, что и для препаратов, фиксированных по Боуэну. Как и в том случае, цитоплазма окрашивается основными красителями, такими, как тионин, а нуклеоплазма не окрашивается. Однако нуклеоплазма имеет вид более узких пятен, чем при фазово-контрастной микроскопии живых клеток. Фиксированные OSO4 препараты пригодны для окрашивания нуклеоплазмы по Гимзе либо после гидролиза рибонуклеазой (100 мкг/мл в 1 мМ MgS04 в течение 30 мин), либо после гидролиза кислотой. Последний метод состоит из следующих стадий. [c.51]

Микоплазмы, вероятно, представляют собой самые маленькие бактерии, которые можно наблюдать в световой микроскоп и которые с трудом поддаются индивидуальному распознаванию из-за сильно выраженного плеоморфизма. Характерные колонии микоплазм, имеющие вид яичницы-глазуньи, наблюдают при прямой микроскопии чашек с агаром. Для анализа колоний полезен подход, разработанный Динесом и заключающийся в том, что препараты смотрят после того, как на место роста бактерий наносят каплю метиленового синего и накрывают ее покровным стеклом. В случае объектов, близких по размерам к пределам разрешения, оптические измерения при фазово-контрастной микроскопии затруднены по двум причинам. Первая — это ореольные артефакты и вторая — присущие фазовому контрасту особенности формирования изображения, благодаря которым круглые объекты выглядят меньше, чем они есть на самом деле. В морфологических исследованиях и при изучении подвижности микоплазм применяются влажные препараты. Что же касается типа микроскопирования, то рекомендуются методы фазового контраста и темнопольного освещения. Если нужны окрашенные препараты микоплазм, то предпочтительнее использовать несколько модифицированную методику окраски по Гь м-зе (см. ниже), которую следует применять к предварительно фиксированным организмам. Фиксировать микоплазмы лучше раствором Боуэна (разд. 2.2.1) непосредственно в слое агара, лежащем на покровном стекле. [c.84]

Для получения накопительных культур Desulfotoma ulum a eioxidans [81], которая использует не лактат, а ацетат, применяют среду Виддла и Пфеннига (разд. 8.5.57), содержащую ацетат С помощью фазово-контрастной микроскопии слет,ят за появлением подвижных прямых или слегка изогнутых палочек толщиной 1 —1,5 мкм и длиной 3,5—9 мкм, которые имеют споры, а также яркие преломляющие участки. Для получения отдельных колоний используют метод встряхивания пробирок. После 3 нед инкубации колонии отбирают и нагревают 10 мин при 70 °С такая тепловая обработка помогает выделению D a etoxidans, когорый является спорообразующим микроорганизмом. [c.313]

Культуры, поддерживаемые в статическом состоянии (не встряхивавшиеся во время роста) в течение 4 нед, изучают методом фазово-контрастной микроскопии. Кокковидные тела могут обнаруживаться уже на 2-й или 3-й день. Положительная реакция преобладание круглых преломляющих свет форм с диаметром, превышающим диаметр исходных клеток, и не имеющих утолщенной стенки. Многие формы имеют дискретные темные периферийные участки цитоплазмы, в других случаях клетки выглядят пустыми. Кокковидные тела встречаются у некоторых спирилл, вибрионов и кампилобакте-ров. [c.19]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология