ацилированные белка

После гидролиза растительных белков остаточные полипептиды можно видоизменять различными способами и особенно посредством реакций ацилирования. Эта химическая модификация заключается в реагировании различных ацилирующих агентов типа ангидридов моно- или дикарбоновых кислот, таких, как ангидрид уксусной, янтарной, пропионовой, глутамине вой или яблочной кислот, с полипептидами, имеющими функциональные группировки — аминные, кислородные или серосодержащие. [c.610]

Химические свойства белков в известной степени повторяют свойства аминокислот, входящих в их состав и выделяемых при их гидролизе. Подобно аминокислотам, белки можно ацилировать, алкилировать они реагируют с азотистой кислотой, образуют соли, эфиры, амиды и т. д. Особенно характерно для белков гидролитическое расщепление под действием кислот, щелочей и особой группы [c.702]

Свободные аминогруппы белка можно ацилировать действием хлорангидрида или ангидрида кислоты. [c.292]

Рибосомы представляют собой место синтеза белка, содержат РНК и ацилирующие энзимы, холин- и витамин А-эстеразы, апиразу. В идентичной по размерам частиц микросомальной фракции содержатся ферменты переработки углеводородов и липидов, энзимы, связанные с явлением люминесценции. [c.213]

С целью исключить возможность расщепления по триптофану и тирозину 0-ацилируют остатки тирозина [170] и избирательно алкилируют остатки триптофана с помощью 2-гидрокси-5-нитробензилбромида [206]. Из-за низкого выхода и окисления боковых групп некоторых аминокислот, в особенности серусо-держащих, эта методика редко применяется для фрагментации белков и пептидов. [c.124]

Следует учитывать и другой фактор, присущий исключительно биологическим системам,— оптическую чистоту. Белки состоят из L-аминокислот. Поэтому при химическом синтезе следует исходить из L-аминокислот, а в процессе синтеза рацемизация должна быть сведена к минимуму. В наибольшей степени это относится к синтезу ферментов, каталитическая активность которых зависит от оптической чистоты. Аминокислоты особенно легко подвергаются рацемизации, когда они ацилированы (т. е. когда аминогруппа блокирована ацильной группировкой) через промежуточное образование азлактона. Такое превращение может произойти, например, в процессе введения защитной группы или в процессе образования пептидной связи [c.68]

Полимеры, содержащие азот [13]. Белки. Химические свойства белков определяются природой амидной связи и функциональными группами (карбоксильной, гидроксильной, аминной, дисульфидной), входящими в состав радикалов К аминокислот. Под действием кислот, щелочей и ферментов белки гидролизуются, распадаясь на аминокислоты. Белки можно ацилировать и алкилировать. Широко используется в промышленности процесс дубления белков, в результате которого они теряют растворимость. Процесс дубления сводится к взаимодействию бифункциональных соединений, например формальдегида, с молеку- [c.259]

Ступенчатое наращивание пептида с применением второй фазы впервые проведено Меррифилдом на примере твердофазного пептидного синтеза (разд. 2.2.7.1). При реакциях в гетерогенной фазе вероятность встречи реагирующих партнеров гораздо ниже, чем в гомогенном растворе. Для получения высокой степени превращения требуется значительный избыток ацилирующего средства. Преимуществом этой стратегии является простота технических операций и связанная с этим возможность автоматизации. Трудные операции очистки промежуточных веществ традиционного синтеза заменяются простыми процессами фильтрования и промывания. Однако на этом пути однородный продукт синтеза получается только в том случае, если каждая реакция в гетерогенной фазе протекает практически количественно. Несмотря на большие избытки карбоксикомпонента, использование которых чревато опасностью N-ацилирования пептидной связи, полное превращение на каждой стадии в настоящее время недостижимо. На практике средний выход на одну стадию 95—99%, что недостаточно для синтеза длинных пептидов или белков. Средние выходы на одну стадию и полные выходы (в зависимости от длины цепи) приведены в табл. 2-10. Как показывает практика, короткоцепочечные пептиды или их аналоги длиной до -15 аминокислотных остатков могут быть получены твердофазным методом. Трудности при синтезе небольших белков наглядно демонстрируются данными табл. 2-10. Еще хуже сказывается накопление не- [c.214]

Для повышения специфичности расщепления сложноэфирной связи по сравнению со специфичностью кислотного гидролиза Эллиот ацилировал свободные аминогруппы при pH 5. В результате обработки ацилированного белка 0,01 и. щелочью при комнатной температуре в течение 1,5 час значительно увеличивается количество диализуемого азрта, что согласуется с гидролизом эфирной связи с образованием смеси ацетил- или формилсерилпептадов. От этих пептидов ацильные группы были отщеплены обработкой на холоду раствором хлористого водорода в метаноле окисление перйодатом продукта реакции позволило установить, что из общего числа остатков серина в цепи 62% составляют концевые свободные остатки. Описанные выше реакции, которые Эллиот [96] использовал для селективного расщепления Пептидных цепей по остаткам серина и треонина, протекают по следующей схеме [c.219]

Так как ложное кодирование очень сильно зависит от целого ряда как внешних, так и структурных факторов, то очевидно, что в бесклеточных системах его уровень может варьировать в чрезвычайно широких пределах. Поэтому важно оценить, каков естественный уровень ложного кодирования в нормальных живых клетках, не подвергаемых тем или иным экстремальным воздействиям и не содержащих мутационных нарушений белоксинтезирующего аппарата. Однако оценить это нелегко по ряду причин. Во-первых, на стадиях, предшествующих связыванию аминоацил-тРНК, тоже возможны ошибки, например, ложное ацилиро-вание тРНК оно будет завышать оцениваемый уровень ложного кодирования. Во-вторых, на стадиях после связывания аминоацил-тРНК и включения ложной аминокислоты в пептидную цепь возможна элиминация ложного продукта — либо путем аборта растущего пептида, либо путем переваривания окончательного неправильного белкового продукта. В-третьих, если готовый неправильный продукт обладает другими свойствами, чем правильный, то он может не встраиваться в те структуры, в которых мы его ищем, или не выделяться теми процедурами, которые мы используем для данного белка. Два последних обстоятельства будут занижать оцениваемый уровень ложного кодирования, и могут занижать его сильно. [c.172]

Поскольку ДФФ не является полным структурным аналогом нормальных субстратов этих ферментов, опасность присоединения метки не к активному центру, а к каким-то другим участкам молекулы фермента в этом случае, естественно, больше, нежели в случаях описанных выше. Однако скорость, стехиометрия и специфичность реакции присоединения ДФФ явно указывают, что метка действительно попадает в активный центр. Известно, например, что ДФФ специфически фосфорилирует один из двух остатков серина в химотрипсине. Химотрипсин может быть помечен и многими другими аналогичными агентами, в том числе и-нитрофенилацетатом, причем в каждом случае аципируется одна и та же гидроксильная группа серина, тогда как никакие другие группы не ацилируются. Во многих (хотя и не во всех) исследованных эстеразах и протеиназах ДФФ фосфорилирует гидроксильную группу только того серина, с К-концом которого связан либо аланин, либо глицин. Данные, характеризующие окружение реакционноспособного серина в некоторых белках, приведены в табл. 29. Из таблицы видно, что даже ферменты, сильно различающиеся по своей специфичности, могут иметь одинаковую последовательность аминокислот в участках, примыкающих к остатку серина, содержащему реакционноспособную гидроксильную группу. Это позволяет думать, что специфичность фермента и его способность ката- [c.198]

При использовании ферментов возможны различные пути. Обычно они основаны на том, что в живых организмах ферментативные системы реагируют с тем энантиомером, который встречается в природе. Например, Пастер обнаружил, что грибок плесени Peni illium glau um разрушает природную (-f)-винную кислоту, а не (—)-энантиомер, не встречающийся в природе. Если в синтетическую ( )-винную кислоту внести эту плесень, то разрушаются молекулы ( + )-кислоты и в растворе остаются молекулы (—)-кислоты таким путем из ферментированной смеси получают чистую —)-кислоту. Причина, по которой хиральный фермент реагирует только с одним из двух энантиомерных субстратов, была объяснена выше. В другом случае вместо разрушения одни из двух энантиомеров подвергается химическому превращению. Например, при расщеплении синтетических а-аминокислот на оптически активные аминокислоты (из которых построены все природные белки) рацемическую кислоту сначала ацилируют и получают рацемическую ациламинокислоту. Последнюю затем гидролизуют в присутствии фермента ацилазы, получаемого из почки свиньи. Ферментативный гидролиз затрагивает только ацетильные производные природных (обычно S) аминокислот эти аминокислоты получаются таким образом в свободном состоянии и легко отделяются от оставшихся ацетильных производных R-аминокислот. Свободные R-аминокислоты можно получить гидролизом оставшихся R-ацетиламино-кислот обычными химическими методами (например, в присутствии соляной кислоты). [c.31]

Полимеры, содержащие азот. Б е л к и. Химические свойства белков определяются лриродой амидной связи н функциональными группами (карбоксильной, гидроксильной, а.минной, ди-сульфидной), в.ходящи.ми В состав радн калов Н аминокисло . Под действне >1 к слот, щелочей и ферментов белки гидролизуются, распадаясь. па а.минокислоты. Белки можно ацилировать, [c.258]

В рассмотренных до сих пор механизмах синтеза принимают участие две содержащие аминогруппы молекулы. Можно также считать, что на первой стадии аминокислота N-ацилируется кислотой и что аминирование последней происходит после конденсации. Например, пировуилаланин теоретически может служить акцептором в реакции трансаминирования, в ходе которой он превращается в аланилаланин. Такое трансаминирование с химической точки зрения возможно [521], однако сомнительно, чтобы соответствующий процесс играл особенно большую роль в биосинтезе пептидов и белков. Как было впервые показано Шен-геймером, аминокислоты могут в известной степени внедряться в белки тканей, е подвергаясь предварительному дезаминиро-ванию. [c.195]

Ацилирующие агенты относятся к тем веществам, которые наиболее часто применяются для изменения белков, хотя, как это видно из данных табл. 1, ни один из этих реагентов не является специфическим по отношению к какой-либо функциональной группе. Все они. реагируют с аминогруппой — иногда предпочтительно, но никогда селективно большинство из них взаимодействует также с фенольными гидроксильными группами, сульф-гидрильными группами, а нередко и с другими функциональными группами, образуя соответствующие производные. Для ацилиро-вания одного и того же белка — вируса табачной мозаики — применялись следующие вещества кетен, фенилизоцианат, карбо-бензоксихлорид, хлорангидрид n-хлорбензойной кислоты и бензо-сульфохлорид. [c.302]

На первой стадии ферментативного процесса происходит физическая сорбция субстрата (образование комплекса Михаэлиса ЕЗ) за счет гидрофобного взаимодействия Е-В между боковой группой субстрата К и гидрофобным карманом в глобуле белка Е. Затем сорбированная молекула субстрата ацилирует рядом расположенную гидроксильную группу 8ег-195 с образованием ацилфермента ЕА, который на последней стадии (3) гидролизуется с регенерацией свободного катализатора Е. Кинетическая роль комилексообразования Е И в химотринтическом катализе весьма полно изучена на примере реакции гидролиза метиловых эфиров К-аце-тил-Ь-аминокислот типа КСН(ННС0СНз)С(0)0СНз. [c.209]

Белки, безусловно, являются наиболее известными амфотерными полимерами. Большинство белков содержат и свободные аминогруппы и свободные карбоксильные группы и в зависимости от pH раствора могут вести себя и как кислоты, и как основания. Многие из немодифицированных натуральных белков обладают поверхностноактивными свойствами. Эти соединения понижают поверхностное натяжение водных растворов, причем некоторые из них обладают заметными пенообразующими, эмульгирующими и даже моющими свойствами. Гордон, Браун и Джексон [ИЗ] получили несколько производных казеина, ацилированных жирными кислотами. В этих соединениях ацилиро-вана часть свободных аминогрупп, и в молекуле, таким образом, усиливаются анионные и соответственно ослабляются амфотерные свойства по сравнению с исходным казеином. Хотя эти соединения поверхностноактивны, однако они диспергируются в воде в меньшей степени, чем неацилированный казеин. [c.124]

Большинство вирусных белков лишено свободных концевых аминогрупп, так как концевые аминогруппы у них ацилированы. Поэтому при изучении вирусных белков часто приходится определять ацильные (обычно ацетильные) группы. То обстоятельство, что синтез белков Е. oli и синтез фаговых белков начинается с N-фор-милметионина (см. гл. IX, разд. Б), также указывает на необходимость определения ацильных групп. Наиболее прямым, хотя и не обязательно наиболее надежным, методом служит определение в гидролизате уксусной и муравьиной кислот при помощи газовой хроматографии [c.68]

Ацилирующие агенты (уксусный, янтарный или малеи-новый ангидриды, бензоилхлорид и т. п.) издавна применяются в белковой химии, но для модификации нуклеиновых кислот в нейтральных водных растворах они непригодны. Различные реакции ацилирования были недавно использованы для прощупывания конформации белка ВТМ в вирусной частице. Реакция сукцинилирова-ния и легко обратимая реакция малеинирования приводят к замене — КНз-групп на — СОО -группы. В результате белки вирусной обо [очки диссоциируют на субъединицы и растворяются [59, 154, 447]. Ацилироваться, вообще говоря, могут амино-фенольные и тиоловые группы. Но из них, как правило, лишь аминогруппы находятся на поверхности белков, и, таким образом, эти реакции моишо считать аминоспецифичными. Однако в особых случаях весьма легко ацилируются и фенольные и незащищенные ЗН-группы. Так, в ВТМ один из четырех тирозиновых остатков (ближайший к С-концу, № 139) [c.198]

Окисление сульфгидрильных групп до дисульфидных протекает спонтанно под действием растворенного кислорода воздуха. С целью увеличения содержания тиольных групп в исходном белке проводят восстановление дисульфидных связей подходящим восстановителем, например боргидридом натрия, меркаптоэтанолом, Дитиотреитолом, цистеином или его производными. Однако реокисление тиольных групп при проведении реакции (20) может приводить к образованию неправильных внутримолекулярных дисульфидных мостиков в белке и, таким образом, сопровождаться существенной потерей каталитической активности иммобилизованного фермента. Содержание сульфгидрильных групп в белке можно увеличить за счет введения эндогенных групп, т. е. тиоли-рованием. Для этого, избрав в качестве групп-мишеней аминогруппы белка, обрабатывают их подходящими ацилирующими или алкилирующими реагентами, содержащими защищенную сульфгидрильную группу, например тиолактоном гомоцистеииа. Пример указанного реагента интересен тем, что при его использовании в белке увеличивается содержание сульфгидрильных групп, тогда как число аминогрупп не изменяется (а- и е-аминогруппы белка образуют с реагентом амидную связь, однако реагент несет на себе собственную а-аминогруппу, а также сульфгидрильную, формируемую при раскрытии лактонного кольца). [c.94]

Для установления природы ацилирующего остатка в белках применялись различные методы. Так, ацетильная группа определялась с помощью ферментативных методов [135, 201, 204, 319, 346, 354], колориметрически в виде комплекса с гидрокса-матом железа [227], перегонкой с паром с последующим титрованием [7, 183], идентифицировалась в форме ацетогидразида и 1-ацетил-2-ДНФ-гидразида [301] или 1-ацетил-2-дапсилгидра-зида [329]. Применение ферментативных методов предполагает наличие у исследователя высокоочищенных препаратов соответствующих ферментов и требует, как правило, значительных количеств субстрата (100 нмоль ацетата в образце), хотя описана методика определения ацетата на уровне 3—12 нмоль/мл с флуоресцентной детекцией [135]. [c.266]

Арилазидная группа в отсутствие света практически не реагирует с функциональными группами белка. При освещении происходит фотохимическая реакция, в результате чего образуется нитрен К—N , который активно взаимодействует с амино группами и другими функциональными группами белка. Ско рость реакции можно регулировать интенсивностью облучения К сожалению, высокая активность нитренов приводит к неодно значному протеканию реакции с белком. Обычно сначала про водят реакцию бифункционального реагента с одним из белко в темноте по алкилирующей или ацилирующей группе, а затег добавляют второй белок и генерируют нитрены при освещении Некоторые арилазидные бифункциональные реагенты (5.33 приведены ниже [130, 131) [c.198]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология