Хроматография водорослей

Рис. 7.16. Идентификация продуктов фотосинтеза в водорослях после короткого периода освещения в присутствии радиоактивного диоксида углерода СОг. Для разделения продуктов используется бумажная хроматография. Расположение соединений на бумаге позволяет их идентифицировать. Присутствие синтезированных веществ на хроматограмме выявляли при помощи фотопленки. Она темнела там, где находились радиоактивные соединения.

Для решения первого вопроса были использованы одноклеточные зеленые водоросли (хлорелла и др.) и меченый " СОг. Фотосинтезирующие водоросли помещали в среду, содержащую " Oj, на разные промежутки времени, затем клетки быстро фиксировали, экстрагировали из них спирторастворимые вещества и определяли содержание " С в различных соединениях после их разделения с помощью хроматографии. [c.90]

Радиоактивные соединения водоросли разделяли и идентифицировали методом двухмерной хроматографии на бумаге. Бумажные хроматограммы помещали затем под пресс вместе с фотопленкой, которая чернела в тех местах, где на бумаге находилось радиоактивное пятно. В своей Нобелевской лекции Кальвин отметил, что их первоначальные данные относились к количеству, положению и интенсивности обусловленных радиоактивностью почерневших участков. К сожалению, бумага сама не печатает названия этих соединений, и в тече- [c.194]

Л. извлекают из водорослей горячей водой или разб. к-тами сопутствующие кислые полисахариды отделяют осаждением в виде нерастворимых солей (напр., с катионными детергентами типа цетилтриметиламмонийбромида) или ионообменной хроматографией. М-Цепи и G-цепи разделяют хроматографически с использованием в качестве сорбента диэтиламиноэтилцеллюлозы (ДЭАЭ-сефадекс) в мо-либдатной форме. [c.577]

Ключевую роль в этом исследовании сыграло сочетание методов двухмерной хроматографии на бумаге и радиоавтографии (дополнение 2-В). Суспензия водоросли hlorella (рис. [c.477]

Механизм превращения углекислого газа в производные моносахаридов в зеленых растениях был выяснен в основном работами Кальвина в 1948—1957 гг. Основным методом при этих исследованиях была кратковременная (до 2 сек) инкубация зеленой водоросли hlorella pyrenoldo-sa) в присутствии СО2, экстракция горячим спиртом и анализ экстракта методом бумажной хроматографии с контролем радиоактивности получае- [c.379]

Поэтому до настоящего времени не нашли широкого распространения в области полисахаридов такие виды хроматографии, как распределительная и адсорбционная (отдельные примеры см." ). Более успешным оказалось применение ионообменной хроматографии для разделения кислых и даже нейтральных полисахаридов. Ионообменниками служат обы.ч,но аниониты, полученные модификацией целлюлозы, например ДЭАЭ-целлюлоза. Для элюирования полисахаридов с колонок используют растворы солей или буферные растворы разной концентрации прочно удерживаемые полисахариды элюируют разбавленными растворами щелочей. Таким споссбом легко удается отделить кислые полисахариды от нейтральных, например, пектиновую кислоту от сопутствующего ара-бинана или сульфированные полисахариды водорослей от крахмалоподобных примесей в ряде случаев при таком способе разделения удается освободиться от примесей белка. Нейтральные полисахариды можно разделить, применив ДЭ.ЛЭ-целлюлозу в боратной форме, при вымывании боратным буфером . Описано также успешное применение ЭКТЕОЛА- [c.486]

В последние годы хроматографические методы были использованы для разделения и выделения радиоактивных элементов, весьма близких по химическим свойствам [17]. Эти методы неоднократно использовались также для фракционирования меченых органических веществ. В обзорной работе Роше, Лисицкого и Михеля [44] показано, как важно использовать в различных хроматографических методах изотопы, в особенности при биохимических исследованиях. Многие авторы описали специальное биохимическое применение разных радиохроматографических методов [2, 14]. Особенное впечатление производят исследования Кальвина [13] по ассимиляции радиоактивного углекислого газа и анализ методом хроматографии на бумаге меченых первичных продуктов фотосинтеза в водорослях и других зеленых растениях. С тех пор как Финк, Дент и Финк [16] описали фотографический способ локализации радиоактивных веществ на бумажной хроматограмме, радио авто графия стала незаменимым вспомогательным средством при исследованиях механизма фотосинтеза [5, 6, 13] и других проблем биохимии. [c.66]

Выделение меченых аминокислот достигается следующим образом. Водоросли настаивают в 80% этиловом спирте, затем отделяют центрифугированием и подвергают гидролизу 6н. H I в запаянной ампуле при 105—110° С. Белковый гидролизат упаривают в вакууме и очищают от углеводов, органических кислот и гуминоподобных веществ. Раствор, содержащий смесь аминокислот пропускают через катионит КУ-2 в Н+-форме. Использование в качестве элюента соляной кислоты различной концентрации позволяет разделить смесь на отдельные группы аминокислот (рис. 14). Разделение групп аминокислот на индивидуальные соединения можно осуществить методом препаративной бумажной хроматографии. [c.57]

Исследования проводились с зелеными водорослями хлорелла и сценедесмус, а также с листьями высших растений. В опытах использовали радиоактивные соединения, меченные 0 " и Р 2. В связи с тем, что необходимо было изучить промежуточные продукты фотосинтеза, образующиеся на различных этапах восстановления СО2, продолжительность фотосинтеза в опытах была очень небольшой — от нескольких десятых долей секунды до минуты. После таких коротких экспозиций растения фиксировали кипящим спиртом, т. е. фотосинтез и все ферментативные процессы в растениях прекращали. Затем из растений выделяли растворимые углеводы и другие соединения, которые разделяли методом хроматографии на бумаге. После разделения веществ определялась их удельная радиоактивность, т. е. определялось количество С включившегося за данный отрезок времени из С Ог в то или иное соединение. [c.125]

Совершенно иного типа эксперименты необходимы для выяснения природы реакции, в результате которой происходит превращение рибулозо-5-фосфата в рибулозо-1,5-дифосфат [уравнение (9)]. Кальвин и Массини разработали установку, с помощью которой можно было пропускать ток Og через суспензию фотосинтезирующих водорослей. Подача С Ог менялась в ходе опыта лишь незначительно [18]. Через определенные промежутки времени проводили отбор проб отобранные водоросли фиксировали. Последующий анализ с помощью хроматографии на бумаге и радиоавтографии показал, что при длительности фотосинтеза около [c.543]

При изучении антибиотиков неустановленного строения хроматография на бумаге имеет особенно важное значение, так как она позволяет получить информацию об изучаемом веществе на очень ранних этапах исследования. Как правило, в это время имеются лишь незначительные количества препаратов, к тому же часто малоочищенных. Кроме того, в некоторых случаях бумажная хроматография может быть основным (а иногда и единственным) методом изучения антибиотических веществ. Если при изучении таких продуцентов антибиотиков, как бактерии, грибы и актиномицеты, получение большого количества биомассы не представляет особых затруднений, то возможности исследователя могут быть довольно ограниченными при получении антибиотиков из растений и животных. В этих случаях большое значение приобретают микрометоды, позволяющие проводить работу с небольшими количествами веществ. Поэтому применение хроматографии на бумаге дает возможность резко расширить круг изучаемых объектов. В частности, при помощи хроматографии на бумаге были исследованы такие редкие продуценты антибиотиков, как насекомые [1747], простейшие [30], водоросли [627, 1706, 1748], дрожжи [118, 1749], дерматофитные [c.264]

Первый способ — хроматографическая колонка с салициловой кислотой готовилась по методу Парка и Бергера (Park, Berger цит. по Moikeha et al., 1971). Перед пропусканием через колонку липидная фракция экстракта из водорослей (0,2—0,5 г) растворялась в 10 мл хлороформа. Операцию повторяли. Окончательную-очистку токсина осуществляли с помощью пластинчатой хроматографии на силикагеле. [c.201]

Сырьем для большинства твердых носителей, применяемых в газовой хроматографии, является диатомит, известный также под названием диато.мового кремнезема, диатомовой земли или кизельгура. Диатомит состоит из панцирей диатомовых микроскопических одноклеточных водорослей, которые по своему химическому составу представляют в основном микроаморфную, содержащую воду окись кремния при наличии небольших примесей, главным образом окислов металлов. Отдельные панцири диатомовых водорослей очень малы, пористы и обладают большой поверхностью. [c.61]

Дженкинс и сотр. [77] описали газохроматографический анализ паровой фазы при перегонке с паром растущих и разлагающихся культур зелено-голубых морских водорослей. Параллельно проводили идентификацию пахучих сернистых соединений капельным методом. Ббльшая часть их оказалась производными диметилсульфида и диметилдисульфида. Сильвей и сотр. [78] исследовали методом газовой хроматографии соединения, выделяемые [c.540]

Одр1н из первых примеров использования феномена радиоактивности в биологических исследованиях - изучение превращения углерода в процессе фотосинтеза. Одноклеточные зеленые водоросли поместили в атмосферу, содержащую радиоактивно меченный СО2 ( СОг). и облучали в разные промежутки времени солнечным светом. Затем радиоактивное содержимое водорослей фракционировали с помощью хроматографии на бумаге. Небольшие молекулы, содержащие атомы происходящие из молекул СО2, выявляли на хроматограмме, помещая поверх высушенной бумажной хроматограммы лист фотопленки. Таким образом бьшо идентифицировано большинство основных компонентов, образующихся в процессе фотосинтеза Сахаров из СО2. [c.222]

В ходе исследования Е. sili ulosus было замечено, что суспензия женских гамет издает очень приятный сладкий запах. Это летучее вещество оказывает действие на мужские гаметы, изменяя направление их движения и обусловливая их аккумуляцию в месте наивысшей концентрации вещест ва вокруг женских гамет. В эксперименте мужские гаметы собирались также вокруг капелек минерального масла, содержащего это вещество. Через суспензию, содержащую женские гаметы, и летучее вещество, ими выделяемое, пропускали очищенный воздух, который затем проходил через хо]юдильник при - 80" С. При этом вещество конденсировалось. В течение двух лет было собрано 92 мг вещества (для получения 80 мг необходим 1 кг живого материала), которое далее подвергалось очистке, газовой хроматографии и другим методам, позволившим впервые у водорослей химически идентифицировать молекулы аттрактанта. Это углеводород с эмпирической формулой uHie, названный жтокарпеном. [c.144]

В качестве матрицы в аффинной хроматографии наиболее широко используется агароза. Это очиш,енный линейный содержащий галактозу (рис. 1) аэрогель-ксерогелевый коллоид, выделяемый или из агара или непосредственно из содержащих агар морских водорослей. Агароза характеризуется хорошей гелеобразующей способностью она относительно биологически инертна и поэтому удобна в качестве носителей не только для аффинной хроматографии, но также и для гель-фильтрации. Агар и агароза — не синонимы, и различные агарозные препараты также могут значительно отличаться друг от друга по своим физико-химическим свойствам. Некоторые агарсодержащие морские водоросли приведены в табл. 1. [c.11]

Второй вопрос — природа первичного акцептора СО2. Сначала предположили, что таким акцептором является какое-либо двухуглеродное соединение. Однако введение в инкубационную среду винилфосфата, фосфогликольальдегида и других веществ с С2 не приводило к увеличению содержания радиоактивной метки из СО2 в ФГК. Тогда схему опыта видоизменили следующим образом. Водоросли экспонировали на свету при высокой (1 %-ной) концентрации СО2, затем резко снижали его концентрацию до 0,003%. Расчет был на то, что в условиях дефицита СО 2 быстро накопится именно то соединение, которое служит акцептором СО2. С помощью двумерной хроматографии удалось установить, что при отсутствии возможности карбоксилирования в клетках кратковременно возрастает концентрация рибулозо-1,5-дифосфата (рибулозо-1,5-бисфосфата). Отсюда возникло предположение, что первичная фиксация СО2 происходит следующим образом [c.91]

Все фотосинтезирующие организмы содержат один или несколько органических пигментов, способных поглощать видимый свет, запуская тем цамым фотохимические реакции фотосинтеза. Из большинства листьев эти пигменты можно экстрагировать спиртом или другими органическими растворителями. Выделить индивидуальные пигменты из спиртового экстракта можно методом хроматографии на колонке с сахарной пудрой. Впервые это сделал русский ботаник М. С. Цвет в 1906 г. В растениях и водорослях встречаются пигменты трех основных классов — хлорофиллы, каротиноиды и фикобилины. Хлорофиллы и каротиноиды нерастворимы в воде, а фикобилины растворимы. Каротиноиды и фикобилины называют вспомогательными, или сопровождающими, пигментами, поскольку энергия квантов света, поглощенных этими пигментами, может передаваться на хлоро-4 илл. В табл. 3.1 приведены характеристики поглощения света этими пигментами. Пигменты фотосинтезирующих бактерий описаны в гл. 7. [c.41]

Опыты по изучению пути фиксации СОг при фотосинтезе удалось провести благодаря использованию долгоживущего изотопа углерода С, появивщегося в лабораториях с 1945 г., и применению двумерной хроматографии на бумаге, разработанной несколькими годами ранее. Фиксацию СОг изучали у одноклеточных зеленых водорослей hlorella и S enedesmus. Выбор объекта объясняется тем, что, с одной стороны, эти организмы по своим биохимическим свойствам очень похожи на высщие зеленые растения и с другой — их можно выращивать в одинаковых, стандартных условиях, а при проведении опытов с кратковременной фиксацией углекислоты клетки можно очень быстро убивать. [c.84]

Рис. 6.2. Обнаружение продуктов фиксации СО2 водорослями при кратковремеьном освещении. Используются хроматография на бумаге и радиоавтография.

Второй метод — хроматография на бумаге. Если вещества, разогнанные на хроматограмме, содержат радиоактивные атомы, то их легао обнаружить с помощью радяоавтографии. Применяя указанные методы, можно определить, какие вещества и в какой последовательности образуются из СОг. Наряду с этим использование коротких световых экспозиций позволило уловить первые этапы процесса. В качестве объекта исследований была взята зеленая водоросль хлорелла. После кратковременных экспозиций на свету в присутствии СОг растения фиксировались горячим спиртом. Спиртовой экстракт концентрировался, разделялся хроматографически и анализировался. Опыты показали, что через 5 с пребывапия в атмосфере СОг на свету большая часть радиоактивного углерода-сосредоточивается в трехуглеродном соединения — 3-фосфоглицериновой кислоте (3-ФГК). [c.132]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология