Хроматография белков

Влияние на адсорбцию полимеров химии поверхности адсорбента и природы растворителя. Влияние на адсорбцию полимеров размеров пор адсорбента. Адсорбция из растворов и адсорбционная хроматография олигомеров. Адсорбционная и ситовая хроматография полимеров. Адсорбция и хроматография белков и вирусов. [c.332]

Адсорбция и хроматография белков и вирусов [c.340]

ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ И НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ [c.1]

Лев Абрамович Остерман ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ И НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ [c.2]

Использование высокой сорбционной способности стекла (в виде гранул пористого стекла) для адсорбционной хроматографии белков, нуклеиновых кислот и их компонентов оказалось, вопреки первоначальным ожиданиям, делом малоперспективным из-за тех же трудностей, связанных с плохой воспроизводимостью и необратимостью сорбцией. [c.224]

Очистка и разделение белков (наряду с аминокислотным анализом) — основные области применения ионообменной хроматографии. Верно и обратное — в очистке любого белка этот вид хроматографии почти всегда занимает центральное положение. Поэтому при изложении общих соображений о выборе параметров хроматографического процесса в предыдущих разделах этой главы мы имели в виду прежде всего хроматографию белков. Был приведен соответствующий справочный и методический материал, отмечены аспекты, связанные с сохранением биологической активности и возможностью появления артефактов кажущейся утраты ферментативной активности и [c.301]

Эта область ионообменной хроматографии белков наиболее обширна. Сделаем попытку систематизации используемых здесь приемов, разделив их на шесть групп. Но прежде всего заметим, что постановке хроматографического опыта в любом случае должна предшествовать отработка метода идентификации очищаемого белка (путем обнаружения ферментативной активности или других биоло- [c.302]

Заканчивая рассмотрение аффинной хроматографии белков, необходимо отметить, что вне поля нашего зрения осталась родственная область приготовления и использования иммобилизованных ферментов. Многое из того, что было сказано о способах посадки лигандов на активированные матрицы, имеет к этой области прямое отношение. Однако к кругу физико-химических методов исследования белков и нуклеиновых кислот использование иммобилизованных ферментов имеет лишь косвенное отношение, так что за недостатком места мы на нем остановиться не сможем. [c.435]

Лигандообменную хроматографию белков называют также ме-та.чло-хелат-афинной хроматографией. [c.74]

ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ [c.21]

Большинство аминокислот практически не поглощает свет в доступной для регистрации области, так что их приходится окра-тпвать нпнгидрином. Этот метод окраски будет подробно рассмотрен в приложении 2, посвященном аминокислотным анализаторам. Пептиды и белки поглощают свет в области 206—215 нм за счет пептидной связи и в широкой области спектра с максимумом вбли- и1 280 нм за счет присутствия в них ароматических аминокислот. Азотистые основания и нуклеиновые кислоты хорошо поглощают вблизи 260 нм. Поэтому не удивительно, что основной метод детектирования в хроматографии белков и нуклеиновых кислот — это регистрация поглощения света в ультрафиолетовой области спектра. Соответствующие приборы мы будем для краткости именовать УФ-детекторами. [c.82]

Хроматографию белков нередко пеоб.ходидю вести на холоду. Использовать для этой цели холодную комнату пе всегда удобно. В связи с этим уместно упомянуть специальные холодильные шкафы с прозрачными дверцами, предназначенные для установки в них всего комплекса хроматографического оборудования (кроме регистратора, который удобнее установить снаружи). [c.91]

Следует еш е раз подчеркнуть, что при этом можно ограничиться весьма умеренными перепадами давления на колонке, допустить заметный уровень его пульсации и вообще отказаться от использования дорогостоящих современных хроматографов для ЖХВД в пользу более простых систем, подобных той, которая была разработана для хроматографии белков фирмой Pharma ia и подробно описана в конце гл. 3. Разумеется, при обессоливании или смене буфера, в котором растворен белок, нет нужды вести элюцию столь же медленно, и в соответствующем примере из той же брошюры фирмы LKB использована скорость более 90 мл/см -ч. Еще большие скорости элюции могут потребоваться при использовании гель-фильтрации под высоким давлением для целей технологического экспресс-контроля, например в пищевой промышленности, но в этом случае от требования высокой разрешающей способности метода придется отказаться и нельзя будет обойтись без использования специальной аппаратуры для ЖХВД. [c.161]

Рассмотрению возможностей обратнофазовой гидрофобной хроматографии белков в основном посвящен сравнительно недавно опубликованный обзор [Rubinstein, 1979]. Основные его выводы совпадают с тем, что было сказано выше при рассмотрении обратнофазовой гидрофобной хроматографии пептидов. Для белков с молекулярной массой в интервале 12—30 тыс. Дальтон автор отдает предпочтение силикагелям, модифицированным октилсиланом (Са). В качестве органического компонента элюента, по его мнению, следует предпочесть градиент концентрации пропанола, вплоть до 40%-ной концентрации, если позволяет растворимость белка. Для получения узких пиков рекомендуется в качестве водного компонента использовать буфер высокой (примерно 1 М) концентрации, подавляющий ионное взаимодействие белка с силанольными группами матрицы. При pH 5—6 разрешение получается обычно хуже, чем при pH 4 (формиатно-пиридиновый буфер) или 7,5 (Na-ацетатный буфер). Существенно указание на то, что скорость элюции следует снизить до 60—90 мл/см Ч. Продолжительность фракционирования белков при этом остается относительно небольшой — 1—3 ч. Белки целесообразно разделить предварительно на группы [c.210]

Мы привели довольно длинный список широко известных ад- opGeirroB, которые не используются в интересующих нас хроматографических методах очистки и фракционпрования биополимеров, для того чтобы освободить подход к практически единственному варианту адсорбционной хроматографии, который широко и плодотворно применяется для этой цели. Речь идет о хроматографии белков и НК на оксиапатите. [c.224]

Для высокомолекулярных ионов или амфолитов, например белков, имеет смысл говорить об эффективной емкости обменника, которая зависит от соотношения размеров молекул амфолита и среднего расстояния между ионогенными группами, а также от степени доступности всего объема пористой матрицы обменника для этих молекул. Заметим, что большое значение полной (низкомолекулярной) емкости ионообменннка может оказаться невыгодным для хроматографии белков или нуклеиновых кпслот, поскольку в этом случае возможна многоточечная фиксация макромолекул. В такой ситуации может оказаться целесообразным снижение полной емкости обменника за счет выбора значения pH, отвечающего неполной его ионизации эффективная емкость для макромолекул при этом может остаться максимальной. [c.255]

Это — очень круппопористые, относительно мягкие обменники с Миснл 10 . Они широко используются для хроматографии белков и олигонуклеотидов. [c.270]

ИОНООБМЕННИКИ ДЛЯ ХРОМАТОГРАФИИ БЕЛКОВ ПРИ УМЕРЕННЫХ ДАВЛЕНИЯХ ФИРМЫ <(PHARMA IA [c.276]

Ионообменная ЖХВД позволяет вести хроматографию низкомолекулярных веществ с большой скоростью — до 800 мл/см -ч. Уже не раз подчеркивалось, что скорости такого порядка нельзя применять при хроматографии белков. Линейные размеры гранул для ЖХВД уменьшены по сравнению с обычными ионообменниками в. 5 — 10 раз, а скорость поперечной диффузии тяжелых макролго-лекул, естественно, остается той же самой. Соответственно и скорость элюции при хроматографии белков можно увеличить лишь пропорционально линейным расстояниям диффузии, т. е. до 10— 50 мл/см -ч. [c.295]

Пример 4. Очистка РПКазы D из Е. oli [ udny et al., 1981]. Здесь хроматографию на слабых анионообменниках использовали на двух первых этапах очистки. Интересно сопоставить их между собой. Освобожденный центрифугированием от рибосом гомогенат 300 г бактерии вносили на колонку DEAE-целлюлозы (8 X 25 см), уравновешенную 0,06 М раствором КС1 в 0,02 М Трис-НС1 (pH 7,5) с обычными для хроматографии белков защитными добавками (5 мМ [c.303]

Впрочем, такое положение может в недалеком будущем измениться в связи с наметившимися возможностями распространения на хроматографию белков современных высокоэффективных методов, основанных на пспользованин особо мелкозернистых, гомогенных и вместе с тем крупнопористых ионооб.менников. [c.313]

Для хроматографии относительно длинных (до 20 остатков) олигонуклеотидов было предложено пришивать на силикагелевую матрицу полиэтиленимин (PEI), подобно тому как было описано выше для хроматографии белков. Здесь нет нужды образовывать толстый слой полиэтиленимина, поэтому модификация осуществлялась проще. Через силикагелевую колонку прокачивали 10%-ный раствор PEI в метаноле, потом подавали в нее раствор сшивающего агента (диглицидилэтиленгликспя), оставляли его в колонке на [c.323]

К матрице аффинного сорбента, помимо общих для всех хроматографических матриц требований (нерастворимость п гидрофильпость, жесткость, подходящая форма и размер гранул, химическая стабильность в условиях модификации и в самом хроматографическом процессе, отсутствие неспецифической адсорбцип ж др.), предъявляется требование наличия химических групп, позволяющих с помощью несложной химической реакции ковалеитио связывать с матрицей разнообразные биологические молекулы (лиганды и спейсе-ры). Наиболее удобными с этой точки зрения оказались гидроксильные группы полисахаридных матриц — агарозы и сефадексов, а также амидные группировки полиакриламидного геля. Если иметь в виду аффинную хроматографию белков или использование белко- [c.342]

Для иллюстрации изложенных в предыдущем разделе обш их соображений и возможностей использования различных аффинных сорбентов рассмотрим определенное число примеров, отобранных из периодической научной литературы последних трех лет. Большая их часть относится к очистке ферментов клеточного метаболизма (и отдельно — белков, регулирующ,их активность нуклеиновых кислот). Далее будут приведены примеры аффинного фракционирования и очистки самих нуклеиновых кислот, в том числе на иммуносорбентах. Основное внимание уделим более простому и универсальному методу — неспецифической элюции, однако био-снецифическая аффинная элюция белков тоже будет представлена несколькими типичными примерами. Рассмотрение начнем с использования сорбентов с индивидуальной специфичностью, ограничившись здесь тремя примерами, поскольку нет смысла пытаться сколько-нибудь полно иллюстрировать бесчисленное разнообразие возможных сорбентов этого типа. Аффинная хроматография белков клеточного метаболизма на сорбентах с групповой специфичностью будет иллюстрирована подробнее, а затем последуют два примера использования ковалентной хроматографии. [c.412]

Наиболее широкое распространение среди носителей для гель-хроматографии белков получили сорбенты, приготовленные на основе декстрана (сефадексы, сефакрилы, молселекты), полиакриламида (биогели Р, акрилексы) и агарозы (сефарозы, биогели А) и др. Набухая в воде, они образуют гели. [c.106]

Из большого числа поверхностно-активных веществ, пригодных в качестве сорбентов при адсорбционной хроматографии, в белковой химии широкое применение получили гели фосфата кальция. В настоящее время в хроматографии белков чаще используют особую форму фосфата кальция—гидроксилапатит (Са50Н(Р04)з). Эта форма более устойчива в широкой области pH и обладает большей стабильностью. Гидроксилапатит готовят смешиванием растворов хлористого кальция и двузамещенного фосфата натрия. Образующийся осадок двузамещен-ного фосфата кальция под действием концентрированной щелочи гидролизуется в новую разновидность фосфата кальция — гидроксилапатит. [c.114]

К сорбентам для высокоэффективной эксклюзионной хроматографии белков, ферментов и других биологических объектов предъявляются значительно более жесткие требования по инертности поверхности, чем к сорбентам для разделения синтетических полимеров. Кислые силанольные пруппы силикагеля обладают высокой адсорбционной активностью, проявляют слабые ионообменные свойства и способны денатурировать белковые молекулы. Поэтому поверхность жестких сорбентов очень тщательно модифицируют прививкой монослоев нейтральных гидрофильных органических групп. К таким сорбентам относятся ц-бондагель Е и материалы, содержащие глицерильные группы. Поверхность д-бондагеля Е модифицирована алифатически-ми эфирными группами. Колонки с этим сорбентом можно использовать с любыми растворителями от пентана до буферных растворов в области pH от 2 до 8. Они характеризуются высокой разрешающей способностью, но из-за малого рабочего объема (примерно 1,2 мл на колонку) требуется особо точная подача подвижной фазы. [c.108]

Дальнейшую очистку ферментного препарата, содержащего в небольших количествах примеси белков, сходных по физико-химическим свойствам с ферментом, ведут методом ионообменной хроматографии. Белки в ионообменном процессе взаимодействуют с ионитом и при помощи электростатического взаимодействия связываются с его поверхностью. Для элюирования белков с поверхности ионита используют изменение концентрации при pH пропускаемого через ионит буфера или введение нейтральных солей (ЫаС1, КС1). [c.203]

У большей части белков в процессе хроматографии сразу происходит изменение величины К[От О до 1.Это вызвано тем, что белки либо прочно сорбируются на ионообменнике, либо выходят с элюирующим буферным раствором, поскольку происходит одновременная взаимная нейтрализация многочисленных реакций взаимодействия между белком и ионообменником при данных pH и ионной силе раствора. Поэтому важно тщательно подбирать буферный раствор для ионообменной хроматографии белка. Ионообменную колонку обычно загружают при низкой ионной силе раствора. Для катионообменника оптимальная величина pH равна 4—5, для анио-нообменника 7—8- Элюирование с колонки катионообменника происходит при увеличении pH буферного раствора, а с колонки анионо-обменника — при уменьшении pH. В том и другом случае с изменением pH можно увеличивать ионную силу. Изменение pH и ионной силы элюирующего буферного раствора можно производить поэтапно (ступенчатое элюирование) или непрерывно (градиентное элюирование). [c.22]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология