ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Получение органофильных гелей из "Гель-хроматография" ПЫТКИ Вогана [30] и Кортис-Джонса [31] использовать этот полимер для гель-хроматографии оказались не очень успешными. При фракционировании полистирола [30] на этом хорошо набухающем геле оказалось, что он обладает низкой пористостью при фракционировании на нем низкомолекулярных соединений различного строения преобладали процессы адсорбции и распределения [31]. Тем не менее вскоре было установлено, что на содержащем 2% дивинилбензола полистироле, заполимеризованном в виде сферических гранул, удобно разделять по молекулярному весу некоторые липиды [32]. Он оказался также эффективнее многих носителей при разделении олиго-фениленов [26]. [c.43] Поскольку полистирол является основой ионитов, система стирол — дивинилбензол исследована очень детально [1—4]. Для ионообменной хроматографии важно лишь, чтобы гель был мелкопористым, гель-хроматография требует, чтобы гель имел поры заданных размеров. [c.43] Описанные выше полистирольные гели, обладая жесткой структурой, имеют одинаковую пористость в самых различных растворителях. Поэтому элюент в колонке в процессе эксперимента можно легко заменить другим. При высушивании такие гели сжимаются незначительно, т. е. они сочетают в себе одновременно свойства ксерогеля и аэрогеля. [c.45] В литературе описаны отдельные случаи разделения высокомолекулярных соединений на носителях, вообще лишенных способности набухать. [c.45] Такой пористый стеклянный порошок начала выпускать недавно фирма Bio-Rad (Ричмонд, Калифорния, США), однако данные о его экспериментальной проверке еще не опубликованы. [c.47] Несомненно, будут разработаны и другие носители для гель-хроматографии. При этом главной целью должно быть получение стандартно пористых, инертных, по возможности жестких структур с широкой областью применения. Носители, уже имеющиеся в продаже, рассматриваются в следующем разделе. [c.47] Этот гель декстрана является в настоящее время наиболее широко распространенным носителем для гель-хроматографии. Выпускаются восемь типов сефадекса, различающихся по степени набухания (табл. 5). Области применения сефадексов различных типов определяются их пористостью и в значительной мере перекрываются между собой. Каждый тип сефадекса, выпускаемого в виде небольших шариков, подразделяется на несколько фракций. Сверхтонкая фракция предназначается главным образом для тонкослойной хроматографии (см. стр. 84), однако ее можно применять и для хроматографии на колонке, причем в этом случае достигается очень тонкое разделение. Среднюю и тонкую фракции предпочтительнее использовать для обычного препаративного разделения, т. е. там, где скорость протекания не должна быть слишком низкой. Сефадексы G-25 и G-50 выпускаются также в виде грубой фракции, которая предназначается для исследований с применением центрифугирования, а также для хроматографии на препаративных колонках. [c.47] Гель каждого типа выпускается также в виде сверхтонкой фракции (размер зерен 10—40 мк). [c.48] ОТ применяемого буфера) такая колонка уже непригодна к работе. Во избежание такого зарастания колонки сефадекс консервируют, добавляя в элюент 0,02% азида натрия или насыщая его хлороформом. Однако при работе с сильно набухающими сефадексами (0-100—0-200) добавление органического растворителя может привести к уменьшению объема геля. [c.50] Гель сефадекса можно хранить в набухшем состоянии можно также вновь его высушить. Для этого гель промывают вначале водой для удаления солей, а затем обрабатывают 50%-ным этанолом, в результате чего объем геля уменьшается вдвое. Для удаления остатков воды гель выдерживают, встряхивая время от времени, в течение получаса в двух объемах 99%-НОГО спирта, а затем отделяют фильтрованием промывание 99%-ным спиртом повторяют еще несколько раз, после чего гель высушивают при 60— 80° в итоге получают сухой сыпучий порошок. Если при промывании спиртом вода была удалена не полностью, то при высушивании сефадекс слипается в комки, которые, однако, при вторичном набухании распадаются. [c.50] При нагревании до 120° сухой сефадекс приобретает коричневую окраску. Однако в набухшем состоянии он не изменяется при стерилизации в автоклаве в течение 40 мин при 110°. Сефадексы типа О набухают не только в воде, но также и в диметилсульфоксиде, формамиде и гликоле, причем степень набухания в этих растворителях иная, чем в воде. Набухание таких сефадексов в диметилсульфоксиде должно быть на 50—100% выше, чем в воде [42]. Добавление к водным гелям спиртов вызывает их значительную усадку. Сефадексы 0-10 и 0-15 набухают также в диметилформамиде. [c.50] Этот сшитый полиакриламид также поступает в продажу в виде частиц сферической формы. Однако в табл. 8 приведены размеры гранул набухшего геля, поскольку при высушивании шарики обычно сильно слипаются. Существует 11 типов биогеля, различающихся емкостью по растворителю (воде). Область применения этих гелей такл е определяется степенью их набухания. Степень набухания мало зависит от ионной силы растворителя. Для набухания сухого порошка требуется от получаса (Р-2) до 24 час (Р-300). Биогель устойчив в области pH 2—И. [c.51] В более щелочной области возможен гидролиз амидных связей. Образующиеся при этом карбоксильные группы придают гелю ионообменные свойства. По нашим данным, биогель не рекомендуется применять для длительных экспериментов при pH выше 9. Свежий гель также содержит небольшой процент карбоксильных групп, которые, однако, не оказывают существенного влияния на разделение при работе с элюентамн, содержащими соли. Будучи синтетическим полимером, биогель устойчив к микроорганизмам. [c.52] Вернуться к основной статье