ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Принцип эксклюзии из "Гель-хроматография" При обсуждении объемных соотношений в слое геля исходят из предположения, что в набухшем геле имеются, области, куда могут проникать лишь такие молекулы, размеры которых не превышают некоторой определенной величины. Наличие в гелях областей, соответствующих молекулам определенных размеров, Флодин [13] объяснял специфической структурой геля. В набухшем ксерогеле концентрация полимера вблизи поперечных мостиков (сшивок) настолько высока, что крупные молекулы уже не могут проникнуть в эти области. Размеры и число таких областей определяются степенью сшивки геля (т. е. его способностью к набуханию), с одной стороны, и размерами молекул исследуемого вещества — с другой. В аэрогелях или подобных им жестких носителях (например, в стирагеле) размеры труднодоступных областей уже определены специфической структурой полимера. В этом случае действительно можно говорить о порах , существование которых в ксерогеле можно допустить лишь при значительном упрощении. [c.115] Время пребывания веществ на колонке должно соответствовать скорости диффузии, т. е. вещества должны успеть проникнуть в доступную для них область. [c.115] Соблюдение этого условия обязательно для получе- ния воспроизводимых результатов. По-видимому, оно выполняется при использовании выпускаемых в настоящее время гелей (см. гл. П). Расчеты Флодина [13], а затем Альтгельта и Мура [19] показали, что скорость диффузии в этих гелях достаточно высока, чтобы вещества могли достичь внутренних областей гранул. Экспериментально это подтверждается тем фактом, что объемы выхода не зависят от реальной скорости потока в колонке, даже если равновесие далеко от идеального. [c.116] Эта зависимость выполняется (хотя и не всегда) при хроматографировании целого ряда белков на различных гелях сефадекса [22]. [c.117] Допущения, сделанные Поратом и Сквайром относительно геометрической формы доступных областей геля, довольно произвольны однако они вполне наглядно объясняют связь между параметрами элюирования и молекулярным весом. Во всяком случае, тот факт, что выведенные уравнения подтверждаются экспериментом, говорит в пользу исходной концепции, согласно которой часть фазы геля недоступна Для молекул вещества. [c.117] Лорент развил иную трактовку механизма эксклюзии, которая в большей степени соответствует реальной структуре геля. Он считал, что набухший гель можно уподобить раствору полимера. Влияние, которое кислый полисахарид (гиалуроновая кислота) оказывает на седиментацию макромолекул, можно объяснить лишь образованием из полимерных цепей трехмерной сетки, которая действует в отношении макромолекул как молекулярное сито [23]. Если к раствору белка прибавлять высокомолекулярный декстран, то по мере увеличения концентрации полисахарида белок осаждается [24, 25]. Можно представить, что при растворении декстран связывает часть воды за счет гидратации, что приводит к осаждению белка. Фактически в этом случае высокомолекулярный белок осаждается в большей степени, чем низкомолекулярный [24]. В другой серии опытов Лорент [26] сравнивал эксклюзию белков (при равновесном диализе против раствора гиалуроновой кислоты) с их поведением при хроматографировании на геле гиалуроновой кислоты равной концентрации [27]. Расчеты подтвердили предположение, что гиалуроновая кислота (независимо от присутствия поперечных мостиков) образует в водном растворе непрерывную сеть, состоящую из длинных линейных цепей. [c.118] Фоцетт и Моррис [62] тоже вычислили значения L и R для обширной серии испытанных ими полиакриламидных гелей. У слабо сшитых гелей L, как и следовало ожидать, линейно зависит от концентрации полимера в геле если же увеличивать количество мономера при высоком содержании сшивающего агента, то значительно возрастает лишь толщина стержня. В этом случае образуется пористый носитель, схематически показанный на фиг. 4, Б. [c.119] Вернуться к основной статье