ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Обессоливание из "Гель-хроматография" Оптимальные условия обессоливания — этого чрезвычайно важного для химии белков приема — уже давно и исчерпывающе исследованы Флодином [1]. [c.137] Когда макромолекулы совершенно не проникают в гранулы геля (/ at, = 0), а соль диффундирует свободно (/ ati=l), различие в объемах выхода равно внутреннему объему колонки (см. гл. П1). Именно этот объем является предельным для того образца, который рассчитывают разделить на данном слое геля. Если же принять во внимание, что диффузия солей редко бывает совершенно свободной (т. е. обычно а зоны в процессе хроматографирования несколько расширяются, то можно прийти к выводу, что объем образца может составлять лишь около 75% внутреннего объема. Это означает, что при работе на сефадексах G-25 и G-50 для того, чтобы обессоливание было полным, объем образца должен составлять менее 40% общего объема колонки. Так и обстоит дело в приведенном примере (фиг. 22, Б). После обессоливания 500 мл сыворотки на сефадексе G-25 (9X60 см, 3 л) объем фракции, содержащей белок, составлял 600 мл [2]. Таким образом, здесь разбавление составило всего 1,2, хотя объем образца был равен лишь 17% объема колонки. [c.138] Следует также указать, что очень вязкие растворы можно обессолить без разведения с помощью корзиночной центрифуги (см. стр. 93). [c.138] Обессоливание можно проводить также на геле полиакриламида для обессоливания белков вполне пригоден биогель Р-10 (соответствующий сефадексу 0-25) [4]. [c.139] Само собой разумеется, что методом гель-фильтрации можно обессоливать не только белки, но также и любые высокомолекулярные водорастворимые соединения. Так, например, удается полностью удалить соли (и фенол) из суспензий различных вирусов [5]. Наличие ионов хлора мешает, например, количественному определению гуминовых кислот [6] или мукопо-лисахаридов (гепарин) [7]. Их можно легко отделить на сефадексе 0-25. Кроме того, в этом случае выход лабильных полисахаридов значительно выше, чем при диализе [7]. Опыт по разделению растворимых компонентов семян злаков показывает, какие количества исследуемого материала могут быть обработаны в определенных условиях за один прием [8]. [c.139] На колонке с сефадексом 0-25 (4 X 70 см, 800 мл) практически полностью разделяют 19,4 г предварительно депротеинизи-рованного экстракта из семян злаков. В одной фракции получают олиго- и полисахариды (6,63%), во второй — сахарозу и соли (87,7%). При разделении экстракта, содержащего белки, нагрузка на колонку составляет только 10 г. [c.139] На сефадексе 0-15 (1,4 X 100 см, 154 мл) в фосфатном буфере (6 мл/час) удалось разделить и обессолить олигосахариды (объем образца 2,5 мл). 10 жг антибиотика пептидной природы (бацитрацин мол. вес 1400) полностью отделили от 10 мг Na l на биогеле Р-2 (1,3X36 см, 48 мл) объем образца был равен 1 мл. [c.140] Взаимодействие с гелем особенно наглядно проявляется при очистке фрагментов нуклеиновых кислот. Так, нуклеотиды удается обессолить на биогеле Р-2 лишь при pH выше 7 объем образца должен составлять менее 10% объема колонки. В противном случае наступает перекрывание с зоной соли. Нуклеозиды, а в особенности основания, задерживаются биогелем так же сильно, как и сефадексом [9]. [c.140] Вернуться к основной статье