ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Кинетические уравнения Анри и Михаэлиса—Ментен из "Кинетические методы в биохимическихисследованиях" Для объяснения экспериментально наблюдаемых зависимостей существуют по крайней мере двй механизма, различающихся по физической картине явления. Впервые на множественность кинетических схем при интерпретации данных биохимической кинетики обратил внимание Анри (Henri, 1902 Henri, 1903). [c.9] На основе эксперименталшых данных в стационарном режиме схемы (1.7) и (1.8) неотличимы, поскольку приводят к одному и тому же уравнению скорости. Дискриминировать эти механизмы из данных по стационарной кинетике реакции невозможно. Достаточно продолжительный период времени существовало мнение, что кинетические методы в этом случае бессильны и вообще невозможно доказать справедливость того или иного механизма реакции. [c.11] Рассмотренные механизмы имеют лишь историческое значение. В настоящее время неизвестны ферменты, которые действовали бы по простой схеме (1.7) или (1.8). Как правило, реальные механизмы включают большое число промежуточных соединений фермента с субстратом, их идентификация, исследование структуры, скоростей образования и расхода и составляют предмет изучения механизмов ферментативных реакций. [c.12] Несмотря на то что схема (1.7) и уравнение Михаэлиса — Ментен не соответствует на молекулярном уровне ни одному механизму реакции, его использование получило большое распространение. Это одно из фундаментальных уравнений ферментативной кинетики. Уравнение Михаэлиса — Ментен феноменологически описывает практически все ферментативные реа1кции, а наблюдаемые отклонения, как правило, связаны с усложнением простейшей схемы. Дело в том, что уравнение Михаэлиса — Ментен отражает фундаментальную особенность ферментативных реакций — участие в механизме процессов лабильных промежуточных соединений субстрата и активного центра фермента. [c.12] Все кинетические схемы, включающие стадии образования и расхода промежуточных соединений, приводят к зависимости скорости от концентрации субстрата типа уравнения Михаэлиса. [c.12] Рассмотрим стационарную кинетику фермент-субстратного превращения в более общем случае- — для системы с участием произвольного числа — п — промежуточных соединений. [c.13] Несмотря на кажущуюся сложность реакции, вне зависимости ог числа и природы интермедиатов, принимающих участие в механизме реакции, стационарная кинетика процесса будет описываться уравнением Михаэлиса. Для характеристики ферментативных реакций обычно определяют оба параметра входящие в уравнение Михаэлиса — Ментен максимальную скорость Ут и константу Михаэлиса Кт- Важно отметить, что без детального знания механизма реакции интерпретация йкат и Кт как констант связывания фермента субстратом и константы скорости превращения фермент-субстратного комплекса неправильна, поскольку для разных кинетических схем константы ккат и Кт могут отражать совершенно различные процессы (ом. табл. 1), тем не менее эти характеристики легко определяются экспериментально и в ряде случаев несут весьма важную информацию о свойствах каталитической реакции. [c.14] В силу существующих реальных ошибок в определении скоростей и концентраций компонентов обычно проводят 5—10 измерений скорости при концентрациях субстрата, соизмеримых с величиной Ст. Для каждой пары измерений можно вычислить эначения Ут я Кт я затем провести статистическую обработку результатов, определив среднее значение и среднеквадратичное отклонение параметра от среднего значения. [c.15] Вернуться к основной статье