ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Методы разделения смесей жирных кислот из "Исследование жирных кислот и липидов методами хроматографии" Данная методика была с успехом применена к разделению смеси стандартных неразветвленных насыщенных жирных кислот с четным и нечетным количеством углеродных атомов от Сю до С19, а также смесей нативных жирных кислот, полученных из липидов холерных вибринов и псевдотуберкулезных бактерий. [c.19] НСООН (3 1). По окончании процесса хроматографирования полосы бумаги просушивают до полного удаления растворителя и проводят повторное хроматографирование их в смеси 98% СН3СООН и 85% НСООН (3 1) (рис. 4). Следует отметить, что предварительное хроматографирование в первом подвижном растворителе только один раз дает четкое разделение жирных кислот с количеством углеродных атомов менее 14 однократное хроматографирование во втором подвижном растворителе — с количеством углеродных атомов от 14 до 19. [c.19] Для хроматографирования при повыщенной температуре сосуд с хроматограммами помещают в сосуд большой емкости. Пространство между стенками малого и большого сосуда заполняют водой. Воду нагревают погружением нагревателя и перемешивают потоками воздушных пузырьков. [c.20] Бумагу очищают путем замачивания на ночь в 95% СН3СООН или смеси ледяной уксусной кислоты и 30% пергидроля (9 1), затем тщательно в несколько приемов по 5 минут промывают водой для удаления уксусной кислоты, высушивают и последовательно промывают ацетоном и бензолом. После удаления последних бумагу пропитывают нисходящим способом раствором парафинового масла (вязкость 335—350) в бензоле необ.ходимой концентрации, затем высушивают на воздухе и 5—6 часов выдерживают под вакуумом над хлористым кальцием. При повышенной температуре (35—40°) оптимальная сепарация была достигнута при 12—15% пропитке. [c.20] Оптимальное разделение жирных кислот при 25° было достигнуто в том случае, если бумага впитывала 19—20% парафинового масла. [c.20] Хроматография. На пропитанную бумагу, нарезанную по форме, предложенной. А. Т. Аствацатурьяном [7], наносят раствор жирных кислот (1 —100 мкг) в метаноле на стартовую линию в виде полосы. Жирные кислоты с длиной цепи от С22 до 24 следует растворять при температуре 35—40°. Анализ проводят в три приема. [c.20] Для сепарации только оксижирных кислот используют 60—70% уксусную кислоту, насыщенную парафиновым маслом. Разделение считают законченным после продвижения фронта растворителя на 17—25 см. [c.20] Хроматографирование при повышенной температуре (35—40°) обусловливает хорошее перемещение н разделение жирных кислот с длиной цепи от С22 до С24, например бегеновой и лигноцериновой кислот. [c.21] Для предотвращения высыхания растворителя у фронта необходимо временами постепенно понижать температуру. Обычно это делают, когда фронт продвинулся на 8—10 см. [c.21] Обнаружение жирных кислот на хроматограммах выполняют переведением их в висмутовые соли при нагревании и последующим переведением их в сульфид висмута обработкой 0,01% раствором односернистого аммония. [c.21] Для установления присутствия ненасыщенных жирных кислот используют йодно-крахмальный способ. Для этого промытую и высушенную хроматограмму опрыскивают 1 % раствором йода в хлороформе. После высушивания фон обесцвечивается и проявляются желтые пятна. Последующее опрыскивание хроматограмм 0,5% раствором крахмала вызывает появление темно-синих пятен на светло-синем фоне. Этот способ менее чувствителен, чем основанный на образовании висмутовых солей жирных кислот. [c.21] С целью полной идентификации 2-оксижирные кислоты окисляют СгОз в уксусной кислоте при 60° до нормальных жирных кислот с углеводородной цепью, меньшей на один углеродный атом. Хроматографирование продуктов окисления проводится в 95% уксусной кислоте при 40°. [c.21] Метод приемлем для исследования небольшого количества насыщенных кислот с нормальной углеводородной цепью, начиная от муравьиной и кончая лигноцериновой, в присутствии большого количества ненасыщенных кислот. [c.22] Хроматография с надкислотными проявителями. Полоски ватмана 1 размером 18,4X61 см смачивают 7% раствором (вес/объем) тяжелого минерального масла в эфире. После удаления эфира на хроматограммы наносят растворы жирных кислот. После того как растворитель испарится, бумагу нагревают в течение 5 минут в сушильном шкафу при температуре 80—90° в течение этого времени нанесенная проба растворяется в подвижном растворителе. [c.22] Подвижный растворитель ледяная уксусная кислота, 88% муравьиная кислота, 30% перекись водорода в отношениях 9 1 1 или 6 1 1 в эти растворы может быть добавлена 1 часть воды. [c.22] Хроматографирование проводят восходящим способом при температуре не выше 37°. После высушивания хроматограммы погружают на 15 минут в 0,1% раствор уксуснокислой ртути, содержащей 0,5 мл уксусной кислоты на 1 л раствора. Избыток уксуснокислой ртути удаляют промыванием хроматограмм струей водопроводной воды в течение 45 минут. После высушивания хроматограммы опрыскивают 0,2% раствором S-дифенилкарбазида в 95% этаноле. Пятна пурпурного цвета сохраняются в течение нескольких дней. [c.22] Хроматография жирных кислот с предварительным окислением. К раствору жирных кислот (1 г в 14 мл уксусной кислоты) добавляют 2 мл свежеприготовленной смеси, содержащей 88% муравьиную кислоту и 30% перекись водорода (1 1). На утро следующего дня раствор разводят 15 мл воды и 2 мл хлороформа. Для исследования используют хлороформный раствор. [c.23] При наличии сложных многокомпонентных смесей жирных кислот для успешной сепарации целесообразно применять различные системы растворителей. [c.23] Вернуться к основной статье