ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Количественное определение белков из "Химия и биология белков" Полученные тем или иным способом осадки (см. предыдущий раздел) могут служить для количественного определения содержания в них белков по Кьельдалю. При использовании этого метода предполагают, что осадок содержит только белковый азот. Однако это предположение не совсем справедливо, потому что вместе с белками осаждаются и другие высокомолекулярные соединения, такие, как полисахаридные кислоты (например, хон-дроитинсерная кислота) и некоторые азотсодержащие липиды (например, лецитины или кефалины). Метод Кьельдаля основан на переводе имеющегося в навеске белкового азота в сульфат аммония путем кипячения белка с концентрированной серной кислотой и сульфатом калия в присутствии катализатора. Обычно принимается, что содержание азота во всех белках равно 16%. В действительности эта величина значительно варьирует. Например, яичный альбумин содержит 15,75% азота, в то время как эдестин содержит 18,7% [34]. Отсюда ясно, что необходимо знать точно содержание азота в исследуемом белке. Хотя метод Кьельдаля представляет собой один из стандартных методов, употребляемых в биохимических лабораториях, получаемые по этому методу результаты часто слищком занижены. Наиболее точные данные получаются при использовании в качестве катализатора ртути [35, 36]. Нагревание белка с серной кислотой и сульфатом калия в присутствии катализатора должно продолжаться в течение 8 час. [34]. При соблюдении этих условий были получены точные данные для ряда белков, содержание азота в которых было известно. [c.19] И других Примесей. Лучшие результаты получаются при колориметрическом определении белка по биуретовой реакции [41—43]. [c.21] Ввиду того что удельный вес кровяной сыворотки в значительной степени зависит от концентрации в ней белков, последнюю можно определить при помощи измерения удельного веса сыворотки в пробирках, содержащих смесь бромбензола и керосина [44]. В качестве стандартного раствора используются растворы сульфата калия различной плотности или растворы сульфата меди. Однако ни один из этих методов не свободен от ошибок, обусловленных частичной зависимостью удельного веса сыворотки от содержания в ней веществ небелкового характера [45, 46]. [c.21] Из этого обсуждения ясно, что количественное определение белков представляет собой довольно сложную процедуру. Большие количества белка можно определить путем прямого взвешивания высушенного осадка, полученного при кипячении растворов белка или при осаждении белка в его изоэлектрической точке. Главная трудность состоит здесь в удалении солей и других растворимых соединений, так как белковые осадки при промывании дестиллированной водой часто дают коллоидные растворы. Иногда этого можно избежать, если промывать белковый осадок разведенной уксусной кислотой или смесью метилового спирта с водой в разведении 1 1, а затем ацетоном и эфиром. [c.21] Для определения очень маленьких количеств белка можно использовать способность тирозина интенсивно поглощать свет в ультрафиолетовой части спектра при 280 m t- [47] или же способность белков восстанавливать реактив Фолина (фосфорномолибденовую кислоту) с образованием синей окраски [48]. Оба метода очень просты и быстры. Однако нельзя забывать, что интенсивность поглощения в ультрафиолете и синяя окраска с реактивом Фолина зависят от содержания тирозина и других ароматических аминокислот, которое варьирует от белка к белку. Необходимо поэтому стандартизировать анализируемую пробу белка по известному белку. [c.21] Вернуться к основной статье