ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Качественный и количественный анализ хроматограмм из "Практикум по хроматографическому анализу" Недостаток этого метода состоит в том, что величина Rf зависит от размера и формы камеры, способа получения хроматограммы, длины пути, пройденного растворителем, и т. д., вследствие чего отклонение одного из этих факторов может привести к значительному изменению Я , что, в свою очередь, приведет к ошибкам анализа. [c.99] Преимуществом метода является возможность при соблюдении всех необходимых условий одновременно на одной полосе фильтровальной бумаги хроматографировать несколько различных смесей. Кроме этого, методика такого анализа хроматограмм значительно проще методики анализа способом свидетелей , так как нет необходимости каждый раз наносить на фильтровальную бумагу растворы-свидетели. [c.99] Денситометры дают возможность построить кривую распределения вещества на хроматограмме в соответствии с интенсивностью окраски отдельных ее участков. Денситометр работает по принципу фотометрирования проходящего через хроматограмму светового потока при передвижении проявленной и окрашенной хроматограммы перед узким пучком света, который, пройдя через хроматограмму, падает на фотосопротивление. В зависимости от плотности окрашенных участков хроматограммы на фотосопротивление падает различное количество света, что вызывает нарушение равновесия в измерительной схеме. Преобразованный и усиленный фототок приводит в действие двигатель, связанный с пишущим устройством. Измерительная схема выполнена так, что движок реохорда перемещается пропорционально плотности окраски пятен на хроматограмме. [c.100] Содержание вещества в расшифрованной хроматограмме пропорционально площади, ограниченной соответствующим пиком записанной кривой и перпендикулярами, опущенными из концов пика на нулевую линию. Площадь пиков измеряют планиметром. Для каждого вещества предварительно строят отдельную калибровочную кривую в координатах площадь — концентрация, после чего получают хроматограмму раствора неизвестной концентрации и, измерив площадь пика, находят по калибровочной кривой концентрацию раствора. [c.100] Для измерения интенсивности окраски можно применять фотоэлектрические колориметры 98]. Однако этот метод применяют в том случае, когда пятна имеют круглую или эллиптическую форму и не перекрываются. [c.100] Описанный способ успешно используется для анализа двумерных хроматограмм [99]. [c.100] Для анализа на бумагу наносят растворы, содержащие определенные количества веществ, легко разделяющихся и проявляющихся на хроматограмме. Затем контуры пятна очерчивают карандашом и определяют их площадь планиметром или же пятна вырезают и взвешивают. На основании полученных данных строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс 1п с, по оси ординат — площадь или массу пятен. Рекомендуется проводить несколько параллельных опытов. Если пятна очерчены резко, точность анализов составляет 10— 15% К недостаткам метода следует отнести зависимость площади пятна не только от концентрации, но и от размера капли, сорта бумаги, темлературы и т. д. [c.101] Положение различных компонентов смеси на хроматограмме определяют следующими способами. [c.101] Для количественной хроматографии методом элюции необходимо, во-первых, полное разделение веществ и, во-вторых, точный микрометод для определения элюированного вещества. [c.102] Недостатком метода является большая трудоемкость опытов и необходимость полного удаления примесей. Последнее обстоятельство представляет особенные трудности в случае нингидринового метода определения -аминокислот, когда в растворе имеются примеси аммиака. Однако этих трудностей значительно меньше при определении других органических и неорганических веществ. [c.102] Большинство определений носит полуколичественный характер. Чувствительность их ниже, чем в бумажной хроматографии. [c.102] образующиеся окрашенные вещества экстрагируются значительно труднее, чем сами разделяемые вещества. Кроме того, сам слой сорбента окрашивается реактивом и возникает необходимость учрта фона слоя. В этом случае можно локализовать разделенные вещества без их дальнейшего превращения, например по их собственной флуоресценции или по поглощению в ультрафиолете на пластинках, покрытых флуоресцирующим составом, а если после экстракции вещества имеются в достаточных количествах, их следует определить физикохимическим методом. [c.103] Во многих случаях после экстракции проводят фотометрическое определение в ультрафиолетовой области или после окрашивания в видимой области. Вначале целесообразно провести холостой опыт, обработав выбранный сорбент экстрагентом. [c.103] В случае экстракции из силикагеля возникают трудности при применении гидрофильных экстрагентов, так как силикагель в виде суспензии переходит в раствор, однако его удается отделить фильтрованием раствора через сульфат кальция. [c.103] Чтобы определить, извлекается ли определенное вещество из сорбента полностью, известную пробу вещества наносят на пластинку, покрытую соответствующим сорбентом. Проведя сушку в соответствующих условиях, вещество экстрагируют, определяют количество его и вычисляют процент ошибки. [c.103] Метод может быть изменен. В этом случае проводят не опрыскивание хроматограмм, а наносят реактив-прояви-тель на пресс-папье, покрытое фильтровальной бумагой, и накатывают его на направляющую хроматограмму. С анализируемой хроматограммы соскабливают зоны при соответствующих значениях экстрагируют и проводят количественное определение. [c.104] Для неорганических веществ методом хроматографии в тонком слое нельзя ориентироваться на величины У / [20]. Значение Rf меняется в зависимости от влажности сорбционного слоя. Однако относительная высота подъема отдельных ионов, нанесенных рядом, — величина постоянная. С другой стороны, эта относительная высота подъема ионов при наличии в смеси нескольких ионов уже не будет постоянной величиной, поскольку ионы взаимно вытесняют друг друга. Поэтому при изучении хроматограмм следует определять ионы по известным реакциям обнаружения. [c.104] Вернуться к основной статье