ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Видоизменения хроматографического анализа из "Хроматографических анализ" Люминесцентно-хроматографический анализ. При хроматографировании растворов, содержащих смесь бесцветных веществ, необходимо изыскивать особые приемы для определения границ хроматографических полос. В ряде случаев это может быть достигнуто путем использования люминесценции различных веществ в ультрафиолетовом свете. Работы в этой области были начаты в 1933—1934 гг. М. А. Константиновой-Шлезингер . Для исследования употребляются кварцевые или тонкостенные стеклянные трубки из высокосортного стекла. Источником света служит кварцевая лампа, снабженная специальными светофильтрами. [c.92] В ряде случаев люминесцирует не только адсорбируемое вещество и растворитель, но и сам адсорбент. Одно и то же вещество, в зависимости от растворителя и адсорбента, может люминесцировать по-разному. Так, например, раствор бензантрона в бензоле дает золотисто-желтую окраску, а при адсорбции его из этого раствора на углекислом кальции, окиси алюминия или тальке—канареечно-желтую. Тот же бензантрон при адсорбции на естественных отбеливающих землях дает зеленую люминесценцию, а при адсорбции на искусственных землях—от золотистожелтой до красно-оранжевой. [c.92] Следует весьма осторожно относиться к данным по люминесценции многокомпонентных систем и идентификации, основанной на сравнении эталона и исследуемого образца сложного состава по их люминесценции. В видимой области спектра можно имитировать окраску любого окрашенного вещества удачно подобранными смесями стандартных растворов окрашенных неорганических солей и даже имитировать спектр поглощения этого вещества, определяемый, например, на спектродензографе. Тождество цвета и его интенсивность еще не означают химического тождества веществ. [c.92] Ряд веществ, не люминесцирующих в чистом виде, может люминесцировать в адсорбированьюм состоянии, что наблюдается, например, при взаимодействии аминокислот с целлюлозой бумаги, приводящем, повидимому, к образованию адсорбционных соединений, о чем указывали еще Цвет и Шилов. [c.92] Константинова-Шлезингер указывает, что отдельные зоны на хроматограмме можно охарактеризовать по их адсорбционной способности (положение полосы на хроматограмме), по цвету люминесценции адсорбата, по действию специфических реактивов, характеру элюирования, цвету люминесценции полученного раствора, изменению его в зависимости от кислотности и по распределению вещества между водной и эфирной фазами. Такое распределение применяется также при идентификации пятен в бумажной хроматографии, например, флавонгликозидов, коэнзимов и др. [c.93] При применении люминесцентных методов необходимо проверять все реактивы и материалы (посуду, бумагу) на отсутствие. юминесценции, которая может быть вызвана настолько малыми примесями, что их нельзя обнаружить другим способом. [c.93] В качестве наиболее подходящего фона для наблюдения слабой люминесценции твердых веществ рекомендуется применять медную фольгу, покрытую черной окисью меди, полученной нагреванием фольги на открытом пламени. В качестве белого фона чаще всего применяют фильтровальную бумагу, предварительно освещенную нефильтрованным ультрафиолетовым светом. Как правило, адсорбция на подходящем адсорбенте дает более сильную люминесценцию, чем при наблюдении того же вещества в растворе. [c.93] На цвет люминесценции сильно влияет концентрация водородных ионов так, например, краситель уроптерин при освещении светом кварцевой лампы в растворе сильных минеральных кислот дает красную люминесценцию в уксусной кислоте—желтую, в растворе, содержащем соду,—зеленую. [c.93] Смесь фенола, резорцина, пирокатехина и флороглюцина можно хроматографировать, смешивая их водный раствор с раствором хлорного железа. Получается темно окрашенная жидкость, хорошо разделяющаяся на отдельные компоненты при хроматографировании на окиси алюминия. [c.94] Применение специфических реактивов. Для выявления зон бесцветных веществ применяют также подходящие цветные реакции. Реактив, дающий цветную реакцию, наносят при помощи кисточки по поверхности столбика адсорбента, предварительно вытолкнув его из трубки . Так, при хроматографическом разделении смеси холестерина и эргостерина зоны обнаруживаются при помощи соответствующей реакции. При разделении бензи-дина и а-нафтиламина на окиси алюминия реактивом служит водный раствор смеси сульфаниловой кислоты и нитрита натрия, дающий с бензидином зеленое, а с а-нафтиламином—красное окрашивание. Зона сернокислого никиля обнаруживается при помощи раствора диметилглиоксима. [c.94] Жидкостная хроматография. Кроме описанных методов, следует упомянуть еще о жидкостной хроматограмме , получаемой по методу Тизелиуса. Ее преимущество заключается в том, что исключается необходимость разрезать или выдавливать колонку из трубки. [c.94] Замечено, что каждое из адсорбированных веществ после вытеснения из колонки образует отдельную фракцию фильтрата. Ряд подобных фильтратов, собранных из одной колонки, в виде отдельных порций образует так называемую жидкостную хроматограмму. Вначале получают первичную хроматограмму, которую затем элюируют до тех пор, пока отдельные компоненты не начнут переходить один за другим в фильтрат. Применяют или одну элюирующую жидкость или последовательно несколько различных жидкостей с постепенно возрастающей элюирующей способностью. Каждая такая жидкость извлекает определенное вещество. В наиболее благоприятных случаях можно подобрать для каждого слоя свой специфический растворитель. [c.94] В жидкостной хроматографии наблюдение за ходом разделения производится измерением концентрации раствора, выходящего из колонки. Изучаемый раствор наливают в специальный сосуд, из которого его передавливают в колонку с адсорбентом, а наблюдают за изменениями концентрации раствора, вытекающего из колонки в кювету. Кювета должна иметь очень малую емкость для быстрой смены раствора, что исключает возможную конвекцию. Измеренные концентрации изображают графически—как функцию объема раствора, прошедшего через фильтр. Полученная характерная кривая позволяет определять качественный и количественный состав изучаемого раствора смеси компонентов. Этот метод имеет ряд преимуществ по сравнению с обыкновенной хроматографией он особенно удобен для анализа смесей бесцветных веществ, при работе с окрашенными адсорбентами, например с активированным углем разделение различных компоне 1-тов в растворе, вытекающем из фильтра, в ряде случаев значительно полнее, чем в колонке. Этот же метод особенно пригодсч для количественной оценки адсорбционных процессов в колонке его можно применять почти для всех смесей различных компонентов, встречающихся на практике. [c.95] Аппаратура и техника исследования при методе жидкостной хроматограс )ии отличаются рядом особенностей от обычно применяемых. Наиболее важным является подбор метода непрерывного измерения концентрации, для чего необходимо выбрать такое физическое свойство раствора, которое не зависело бы от специфических особенностей растворителя и растворенного вещества. [c.95] Наиболее удобным в этом отношении оказался метод измерения показателя преломления этот метод, однако, можно применять только для растворов, концентрация которых не меньше 0,01%. [c.95] При работе с водными растворами сосуд делают из простой стеклянной трубки, снабженной насадками для укрепления столбика адсорбента, и резиновой трубкой, ведущей к резервуару с повышенным давлением (около 3 кг/см ). Раствор проходит через столбик со скоростью 0,5 мл/мин. [c.95] Наиболее ответственным является определение коэффициента преломления света интерферометром высокой точности типа Ре-лея—Габера—Леве1 Этот прибор сконструирован таким образом, что позволяет работать с очень малыми объемами раствора. Кювета прибора представляет собой латунный блок, в котором просверлен цилиндрический канал. [c.96] Фильтр с адсорбентом ввинчивается в кювету, и протекающий раствор собирается в калиброванную бюретку. В блоке кюветы имеется четыре канала через один из них протекает раствор, а три других заполнены чистым растворителем и служат в качестве стандартов при сравнении. Для освещения применяется вольфрамовая лампа. Точность отсчета составляет 5-10 единиц показателя преломления, а весь диапазон измерений равен 6-10 з. [c.96] Второй тип прибора представляет собой самопищущую установку для адсорбционного анализа растворов . По выходе из фильтра с адсорбентом раствор поступает в одну из половин двойной полой призмы, вторая половина которой наполнена чистым растворителем. Луч света, проходя через призму, претерпевает некоторое отклонение, пропорциональное изменению показателя преломления. Само отклонение очень мало, его усиливают с помощью специального устройства, которое состоит из гексагональной стеклянной призмы, делящей световой пучок на два, каждый из которых подается на отдельный фотоэлемент. Оба фотоэлемента соединены с зеркальным гальванометром, который, при одинаковом освещении фотоэлементов, устанавливается на нуль. Отклонение стрелки гальванометра пропорционально изменению показателя преломления жидкости в призме. Зеркальце гальванометра отбрасывает световой зайчик на фотобумагу. При изменении показателя преломления зайчик передвигается по бумаге в горизонтальном направлении. Прошедший через кювету раствор собирается в небольшом сосуде, подвешенном к пружинным весам. С пружиной этих весов соединено зеркало так, что при увеличении веса раствора световое пятно перемещается по вертикали, и, таким образом, показатель преломления и вес раствора, прошедшего через фильтр с адсорбентом, записываются на фотобумагу по двум взаимно перпендикулярным направлениям. Весь прибор заключен в светонепроницаемый ящик. Чувствительность прибора 2-10 единиц показателя преломления. [c.96] Вернуться к основной статье