ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Трансформация растений с помощью агробактерий из "Сельскохозяйственная биотехнология Изд2" Одной из основных проблем при получении трансгенных растений был способ введения чужеродных генов в хромосомы растений, т. е. трансформация растительных клеток. Значительный прорыв был сделан при открытии возможности использования природной системы трансформации растений Ti-плазмидами почвенных агробактерий. [c.51] Таким образом происходит трансформация растительной клетки. В настоящее время еще не до конца известны все механизмы и белки, участвующие в переносе Т-ДНК. [c.54] Векторы для трансформации растений на основе Ti-плазмид. Уникальные биологические свойства Ti-плазмиды делают ее идеальным природным вектором для переноса генов Ti-Плазмида имеет широкий круг хозяев, встраивает Т-ДНК в хромосомы растений, где она может реплицироваться, и ее гены транслируются с образованием белка. Существенно также, что границы Т-ДНК обозначены прямыми повторяющимися последовательностями длиной 25 нуклеотидных пар, и любой фрагмент чужеродной ДНК, вставленный между этими повторами, будет перенесен в растительную клетку. Однако манипуляции с Ti-плазмидой затруднены из-за больших размеров, вставить ген в плазмиду традиционными методами не представляется возможным. Поэтому Ti-плазмида была модифицирована генно-инженерными путями, и на ее основе были получены векторы для трансформации растений. [c.54] Коинтегративный вектор. Один из способов, облегчающий введение чужеродной ДНК в геном растения, заключается в использовании коинтегративных векторов. Смысл подхода состоит в следующем (рис. 2.3). Весь процесс введения чужеродного гена в геном растений делится на два этапа клонирование гена, который следует встроить в растительный геном, и собственно трансформация растительной клетки. Эти два этапа осуществляются с помощью различных векторов. [c.54] Прямая интеграция ДНК aMV в геном хозяина после инфекции не показана. Разработан методический прием — агроинфекция, позволяющий осуществить прямое встраивание вирусной ДНК после инокуляции. Для этого геном aMV встраивается в Т-ДНК и в ее составе интегрирует в ядерный геном различных растений, при этом из состава aMV вырезаются последовательности, обеспечивающие его вирулентность. [c.57] К преимуществам векторных систем на основе вирусов можно отнести следующие малый размер генома, что дает возможность легко манипулировать вирусной ДНК высокая копийность вирусной ДНК в клетках зараженных растений (до 50 ООО на клетку) наличие сильных промоторов, которые могут обеспечить эффективную экспрессию чужеродных генов. [c.57] Среди недостатков следует отметить небольшую емкость вектора (800—1000 н.п.) и ограниченный круг хозяев — крестоцветные. [c.57] В заключение следует отметить, что хотя векторы на основе вирусов редко применяются для трансформации растений, вирусные промоторы, и прежде всего промотор 35S-PHK aMV, широко используется для экспрессии чужеродных генов в других векторных системах. Промотор 35S-PHK вируса мозаики цветной капусты является сильным промотором, кроме того, он активен не только в клетках крестоцветных, но и в клетках других семейств, не проявляет тканеспецифичности и экспрессируется во всех клетках трансформированного растения. [c.57] Вернуться к основной статье