ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Культура одиночных клеток из "Сельскохозяйственная биотехнология Изд2" ВОДЯТСЯ на ткани, полученной не из гетерогенного экспланта, а из одной клетки. [c.95] Одиночная гибридная клетка, выделенная из культуры изолированных протопластов, при дальнейшем ее делении позволяет получить клон, состоящий из гибридных клеток. Это намного облегчает работу исследователя, так как устраняет необходимость отбора потомства в культуре изолированных протопластов от негибридных, что представляет значительные трудности. [c.95] Кроме того, сам процесс соматической гибридизации лучше наблюдать, если работа ведется с одиночными протопластами. [c.95] Выделяют одиночные клетки из клеточных суспензий, из тканей растений, например, из мезофилла листа после его мацерации ферментами, из культуры изолированных протопластов после восстановления клеточной стенки. [c.95] Для получения одноклеточной фракции суспензионной культуры иногда достаточно простого отстаивания в колбе в течение 15— 30 мин. При этом крупные агрегаты оседают на дно колбы, а надосадочная фракция содержит только одиночные клетки или мелкие агрегаты. В том случае, когда при отстаивании не удается получить одноклеточную фракцию, применяют мацерирующие ферменты, центрифугирование в градиенте сахарозы или фильтрование через сита (нейлоновые или металлические). [c.95] Трудности культивирования одиночных клеток связаны с тем, что отдельная клетка не делится в тех условиях, в которых хорошо растет каллусная ткань. Для того чтобы заставить одиночные клетки делиться, разработаны специальные методы. В 1960 г. Джонсон предложил метод няньки , при котором функцию няньки , стимулирующей деление одиночной клетки, выполняют кусочки каллусной ткани, отделенные от нее фильтровальной бумагой. В присутствии няньки одиночная клетка делится и дает индивидуальную колонию клеток — клон. [c.95] Другой метод основан на использовании очень малых объемов богатой питательной среды и представляет собой культивирование одиночных клеток в микрокапле в чашке Купрака объемом 20 мкл. Метод предложен академиком Ю.Ю. Глебой. В микрокаплях удобно наблюдать за получением и делением клеток при соматической гибридизации. [c.95] Вернуться к основной статье