Культура одиночных клеток

Большой интерес представляет культура одиночных клеток. Ее применяют в клеточной селекции для отбора гибридных клеток и их клонирования, а также для генетических и физиологических исследований. Например, вопрос о причинах генетической неоднородности легче решать, используя клон-потомство одной клетки, а не гетерогенную ткань исходного экспланта. [c.167]

Метод кормящего слоя — кондиционирующий фактор выделяют активно делящиеся клетки суспензионной культуры того же вида растений, что и одиночная клетка (рис. 6.2). [c.168]

Каллус можно механически разделить на одиночные клетки и небольшие комочки клеток и выращивать их затем в суспензионной культуре. В такой культуре клетки очень похожи друг на друга все они имеют тонкую первичную клеточную стенку и крупные вакуоли, пересеченные тонкими цитоплазматическими нитями (рис. 19-66). В ряде случаев из одиночных клеток, выделенных из суспензии, удавалось вырастить целое взрослое растение. Эта [c.205]

Выделяют одиночные клетки из клеточных суспензий, из тканей растений, например, из мезофилла листа после его мацерации ферментами, из культуры изолированных протопластов после восстановления клеточной стенки. [c.95]

Для получения одноклеточной фракции суспензионной культуры иногда достаточно простого отстаивания в колбе в течение 15— 30 мин. При этом крупные агрегаты оседают на дно колбы, а надосадочная фракция содержит только одиночные клетки или мелкие агрегаты. В том случае, когда при отстаивании не удается получить одноклеточную фракцию, применяют мацерирующие ферменты, центрифугирование в градиенте сахарозы или фильтрование через сита (нейлоновые или металлические). [c.95]

Однако при соблюдении всех этих условий процент разделившихся клеток остается очень низким. Более эффективны методы кормящего слоя (рис. 10) или ткани-няньки . Для создания кормящего слоя берут суспензию клеток того же вида растения, что и одиночная клетка, или близкого вида. Клеточная суспензия должна находиться в ранней экспоненциальной фазе ростового цикла. Каллусная культура, служащая тканью-нянькой , также должна быть в состоянии активного роста. При достижении колонией, возникшей из отдельной клетки, 0,5—1 мм клон может быть перенесен для дальнейшего выращивания на агаризованную питательную среду непосредственно или на фильтр, помещенный на поверхность агара. Использование кормящего слоя , ткани-няньки и минимального объема среды, в которую помещается отдельная клетка, связаны с феноменом, называемым действие фактора кондиционирования . Несмотря на многочисленные попытки определить химическую природу веществ (или вещества), индуцирующих, деление отдельной клетки, и механизм действия фактора кондиционирования, ясности здесь пока нет. Пожалуй, уверенно можно сказать только то, что фактор этот химической, а не физической природы и включает низкомолекулярные вещества (М. К- Павлова, Р. Г. Бутенко, 1965). [c.29]

Капельный метод Линднера используют при работе с крупными микроорганизмами дрожжами, мицелиальными грибами, водорослями. Порядок работы следующий. Накопительную культуру разводят в стерильной среде с таким расчетом, чтобы в небольшой капле были одиночные клетки микроорганизмов. Затем на поверхность стерильного покровного стекла стерильным стальным пером наносят ряд капель приготовленного разведения. Готовят препарат висячая капля . Нанесенные на покровное стекло капли просматривают под микроскопом и отмечают те, в которых обнаружена только одна клетка. После этого препарат помещают в термостат во влажную камеру, которой обычно служит чашка Петри с увлажненной фильтровальной бумагой на дне. Череа 12—24 ч отмеченные капли вновь микроскопируют. Те капли, в. которых наблюдается образование микроколоний, осторожно снимают с покровного стекла кусочками стерильной фильтровальной бумаги и переносят в пробирки со стерильной средой. [c.79]

В окрашенных мазках из колоний стрептококков не отмечается типичного расположения кокков в виде цепочек. Клетки располагаются одиночно, попарно или небольшими скоплениями. В мазке из культуры в жидкой среде обнаруживают типичные цепочки стрептококков. [c.110]

Эндотелиальные клетки образуют одиночный слой, выстилающий все кровеносные сосуды и регулирующий обмен веществами между кровью и окружающими тканями. Новые кровеносные сосуды развиваются из стенок существующих мелких сосудов в виде выростов эндотелиальных клеток эти клетки способны образовывать полые капиллярные трубочки даже при росте в культуре. В живом организме поврежденные ткани и некоторые опухоли обеспечивают себе кровоснабжение, выделяя вещества, которые стимулируют образование новых капиллярных веточек близлежащими эндотелиальными клетками. Рост опухолей, не способных вызвать такую реакцию эндотелиальных клеток, быстро прекращается. [c.151]

Рнс. 19-66. Культуры каллуса можно поддерживать в жидкой среде в виде суспензии одиночных клеток. На микрофотографии показаны две такие клеткн нз каллуса платана. Это сильно вакуолизированные клетки с хорошо заметными цитоплазматическими тяжами, расходящимися от области ядра [c.205]

Одиночная гибридная клетка, выделенная из культуры изолированных протопластов, при дальнейшем ее делении позволяет получить клон, состоящий из гибридных клеток. Это намного облегчает работу исследователя, так как устраняет необходимость отбора потомства в культуре изолированных протопластов от негибридных, что представляет значительные трудности. [c.95]

Рис. 20-70. Культуры каллуса можно поддерживать в жидкой среде в виде суспензии одиночных клеток. На микрофотографии показаны две такие клетки из каллуса платана. Они сильно вакуолизированы, и от ядра отходят цитоплазматические тяжи. У этих клеток есть первичная клеточная

Бактерии могут выжить, имея лишь единственную хромосому в этом смысле они гаплоидные организмы. Однако динамика их деления и репликации хромосомы такова, что почти при любых условиях роста среднестатистическая бактериальная клетка содержит от полутора до двух полных хромосом. Поэтому в культурах, высеянных сразу же после обработки мутагеном, возникшие мутации с потенциально рецессивным фенотипом (например, связанные с ферментативной функцией) могут маскироваться присутствием неизмененной хромосомы в тех клонах, в которых последняя имеется. В связи с этим целесообразно дать культуре, обработанной мутагеном, расти в течение определенного периода времени и тем самым исключить возможность одновременного присутствия в одной клетке хромосомы, содержащей новую мутацию, и прежней хромосомы. Длительность этого периода зависит как от времени деления той или иной бактерии при росте в данных условиях, так и от специфики роста. Для видов или штаммов, клетки которых при росте образуют цепочки или гроздья (например, бациллы, стрептококки, стафилококки), этот период больше, чем для штаммов, растущих в виде одиночных клеток. При излишнем затягивании выращивания мутантные клетки сами начинают делиться, и тогда в одной клетке может присутствовать несколько копий одной мутации. Если хотят получить ряд независимых мутантов одного типа, то лучше всего еще во время индукции мутаций мутагеном или сразу же после нее поделить культуру на порции и затем из каждой порции отбирать после периода выращивания только по одному мутанту. Как было отмечено ранее в описании методов мутагенеза, если время обработки мутагеном достаточно велико, то выращивание проводят одновременно с индукцией мутагеном, тем самым устраняя необходимость в проведении дальнейшего выращивания. [c.26]

Выбор образца должен производиться с некоторой осторожностью. Образец должен быть наименьших размеров, сравнимых с размерами деталей, которые нужно исследовать. С образцами малых размеров проще обращаться, и они более адекватно обрабатываются в процессе фиксации и обезвоживания. Одним из наихудших источников загрязнения в РЭМ является сам образец. Образцы малых размеров могут быть наиболее адекватно застабилизироваыы и обезвожены, что уменьшает вероятность выделения летучих компонент внутри микроскопа. Частицы ткани размером до 1—2 мм могут быть извлечены хирургическим путем из многоклеточных организмов было бы желательно получать более мелкие частицы растительного материала. Культура ткани, одиночные клетки, микроорганизмы и органеллы изолированных клеток либо могут быть собраны, переработаны в суспензии и помещены в капсулы из агара до обработки, либо их можно осадить и прикрепить на подходящую подложку, например стекло, свежий скол слюды или на диски из металла, совместимого с тканью, с пластмассовым по- [c.222]

Животные клетки образуют псевдоподии (ложноножки), с помощью которых передвигаются по субстрату Псевдоподии обладают адгезинами При образовании или наличии второй клетки, с которой контактирует первая, их псевдоподии осуществляют движения в противоположном направлении — наступает контактное ингибирование Развиваясь в виде монослоя, клетки полностью перестают двигаться и приостанавливают свой рост Плотность клеток может возрасти и за счет многослойности их в культуре Одиночная оплодотворенная яйцеклетка служит источником всех Ю клеток в организме взрослого человека и некоторая часть из них делится (всего по расчетам, происходит 20 делений в секунду) Здесь исключительно важна роль ЦНС, гормонов и других регулирующих факторов [c.151]

Дифференцированный статус клетки наследуется. Это можно четко показать, например, в экспериментах с культурами эпителиальных клеток, образующих пигментный слой сетчатки (рис. 16 2). Поскольку специализация этих клеток проявляется в выработке ими темно-коричневых гранул меланина, следить за состоянием их дифференцировки нетрудно. Клетки шгментного эпитепм можно вьщелить из сетчатки куриного эмбриона и выращивать в культуре, где они размножаются и образуют клоны. Одиночные клетки, взятые из эти клонов, неизменно дают субклоны, состоящие из подобных же клеток пигментного эпителия. Таким способом дифференцированное состояние можно поддерживать более чем в 50 клеточных поколениях. [c.132]

Рнс. 19-55. Одиночная клетка моркови, растущая в культуре in vitro. Это сильно вытянутая цилиндрическая клетка была обработана флуоресцирующими антителами к тубулину, что позволило выявить опоясывающие ее кольцевые пучки микротрубочек. Ориентация микротрубочек в таких клетках определяет ориентацию целлюлозных мнкрофибрилл, откладывающихся в клеточной стенке. (С любезного разрешения .W. Lloyd.) [c.200]

Кроме четких различий по морфолого. ультуральным особенностям, колонии гладкой формы обоих штаммов при просмотре мазков культур, окрашенных по методу Е.И. Хачатурова [28, 29], были представлены дрожжевидными одиночными клетками, преимущественно, округлой, округло-овальной или овальной формы, реже — удлиненно-овальными клетками или их короткими цепочками (рис. 1). [c.58]

Методы генетики соматических клеток растений имеют много важных приложений, поскольку растительные клетки в культуре в отличие от клеток животных обладают очень важным свойством-из одной растительной клетки можно получить целое растение. У животных линия клеток, которые затем образуют гаметы, отделяется от соматических клеток на ранних этапах индивидуального развития особи. По мере этого развития соматические клетки специализируются, при этом они теряют способность при делении восстановить целую особь. У растений генеративные клетки не существуют в виде отдельной клеточной суб-по-пуляции цветок формируется из неспециализированных соматических клеток. Тотипотентность растительных клеток, выращенных в культуре, была впервые показана в 1958 г. Одиночная клетка моркови при пролиферации давала массу недифференцированных клеток, так называемый каллус, которые на среде, содержащей растительные гормоны, подвергались дифференцировке, образуя корни и стебель. На стебле формировались цветы и затем семена. Из этих семян затем вырастали нормальные растения. [c.329]

Эрл (Earle) и сотрудники установили, что одиночные клетки линии L в культуре формируют клоны клеток [c.207]

Клетки эмбриональных тканей и тканей новорожденных используются в качестве исходного материала для выделения специфических типов клеток, которые можно исследовать биохимически либо использовать для создания клеточных культур. Многие клетки растений и животных выживают и часто способны пролиферировать в культуральной чашке при наличии питательной среды соответствующего состава. Разные типы клеток нуждаются в различных питательных веществах, в том числе в одном или нескольких белковых факторах роста. Большинство клеток животных погибает после конечного числа белений, но иногда в культуре клеток спонтанно возникают редкие варианты, способные поддерживаться бесконечно долго в виде клеточных линий. Клеточные линии можно использовать для получения клонов, которые происходят из одиночной клетки-предшественника. Так, можно выделить мутантные клетки, дефектные по одному белку. Можно осуществить слияние различных типов клеток с образованием гетерокарионов (клеток с двумя ядрами), из которых в конечном счете образуются гибридные клетки (ядра клеток которых слились воедино). Гибридные клетки можно использовать для изучения взаимодействия компонентов двух различных клеток. Кроме того, этот метод позволяет ответить на вопрос, в каких конкретно хромосомах находятся те или иные гены. [c.208]

Эксперименты, проведенные на тканевых культурах, показывают, что даже гогда, когда клетки лишаются своего обычного окружения, и оии сами, и их потомки, как правило, продолжают следовать заложенным в них изначальным инструкциям . Рассмотрим, нанример, эпителиальные клетки, образующие пигментный слой сетчатки (рис. 17-2). Поскольку специализация этих клеток проявляется в выработке ими темио-коричиевых гранул меланина, следить за состоянием их дифференцировки нетрудно. Клетки пигментного эпителия можно выделить из сетчатки куриного эмбриона и выращивать в культуре, где они размножаются и образуют клоны. Одиночные клетки, взятые из этих клонов, неизменно дают субклоны, состоящие из подобных же клеток пигмеитиого эпителия. Таким способом диффереицироваииое состояние можно поддерживать более чем в 50 клеточных поколениях. [c.152]

Стоило лишь выявить необходимые для пролиферации Т-клеток условия, как появилась возможность получать неограничеппо пролиферирующие антиген-специфические линии Т-клеток в культуре путем пепрерывпого добавления 1Ь-2 и периодической стимуляции клеток антигеном с целью поддерживать экспрессию рецепторов 1Ь-2. Из таких линий можно было затем вьщелять одиночные клетки и получать клопы Т-клеток. Как мы уже видели, такие клоны сыграли решающую роль в исследовании Т-клеток. Например, опи позволили вьщелить Т-клеточные рецепторы и их гены кроме того, они широко использовались для изучения механизмов активации Т-клеток и роли Т-хелперов в стимуляции ответов других лимфоцитов. [c.273]

Рис. 7.10. А. Схема экспериментальной установки, позволяющей исследовать одиночные клетки культуры спинномозгового ганглия цыпленка методом внутриклеточной записи н ионофореза медиаторов. Б. Влияние различных веществ на потенциал действия исследуемых клеток нанесение некоторых соединений путем ионофореза приводит к укорочению потенциала действия. В. Упрощенные модели различных типов потенциалчувствительных и хемо-чувствительных (т. е. чувствительных к медиаторам) каналов. (Dunlap, Fis hba h, 1978.)

Как растет клеточная популяция и каковы внутренние и внеш-. ние факторы, контролирующие и ограничивающие рост, — вот чрезвычайно существенные биологические проблемы. Объектами исследования служат многие клеточные популяции. Используют диспергированные. культуры одиночных микроорганизмов, таких, как бактерии, дрожжи, амебы и др. Можно также удалить ткань у животного или растения, разделить ее на клетки и выращивать суспензию клеток так же, как и микроорганизмы, или выделить целую ткань и даже отдельный орган и вы]ращивать их in vitro. Наконец, можно выращивать целые растительные и животные организмы, регулируя температуру, свет, влажность, снабжение питательными веществами и т. д.. [c.86]

Используя те же клетки, можно начинать культивирование с клонирования одиночных клеток или проводить анализ методом лимитирующего разведения. В ряде случаев популяцию предшественников В-клеток обогащают или даже выделяют их в чистом виде с помощью положительной селекции, применяя моноклональные антитела к антигенам В-220, АА4.1 или GF1.2. При этом используют методики адсорбции на чашках (пен-нинг), образования розеток или применяют флуоресцентный клеточный сортер. Одиночные клетки можно поместить с помощью микроманипуляций в круглодонные лунки микропанелей и культивировать их в 200 мкл WEHI-K или в присутствии очищенного ИЛ-3. При этом среду меняют каждые 3 ср и положительные культуры размножают в лунках панелей Limbro и во флаконах для тканевых культур. [c.310]

Культуры тканевые — общий термин, который относят к изучению клеток, тканей и органов, поддерживаемых или выращиваемых in vitro в течение свыше 24 часов. Обычно используют следующие варианты термина клеточная культура — растущие in vitro клетки, включая культуру из одиночных клеток в клеточных культурах клетки не организуются в ткани тканевая культура — поддержание роста тканей in vitro в состоянии, при котором может [c.495]

Рис. 143. Использование тка-ни-"няньки" (суспензионная культура) при выращивании колоний из одиночных клеток кукурузы или протопластов (схема) 1 — качалоч-ная колба, 2 — колония, возникшая из отдельной клетки, 3 — фильтровальная бумага, 4 —металлическая сетка, 5 — суспензия клеток "кормящего слоя", 6 — подложка (пенополиуретан), 7 — питательная среда.

Возбудитель туберкулеза — My oba terium tuber ulosis — был описан Кохом в 1889 г. Он представляет собой тонкую, иногда слегка изогнутую палочку (0,3 х 1,5—3,5 л). Клетки одиночные, но иногда образуют сцепления, В старых культурах туберкулезная палочка становится зернистой. Некоторые микробиологи признают живую природу туберкулезной зернистости, допуская, что зерна являются мелкими зародышами этого микроба. Как и у других микробов, у туберкулезной палочки описаны невидимые, фильтрующиеся формы, проходящие через бактериальные фильтры. [c.454]

Как показывают результаты экспериментальных исследований, снижение урожая на обширных территориях происходит не только в лесоводстве, но и в плодоводстве и при разведении других сельскохозяйственных культур. Снижение урожая и роста, как показано в табл. 21, является конечным результатом цепной реакции, начавшейся с проникновения загрязнителя в растительную клетку. Все сделанные до сего времени попытки использовать какую-либо конкретную реакцию клетки или органа растения для установления степени подавления роста оказались несостоятельными (Guderian, Stratmann, 1968 Hill, 1969). Такие одиночные реакции, разумеется, представляют собой важные индикаторы активности загрязнителей, но обычно бесполезны как показатели для оцен- [c.132]

Литературные данные о биохимии нейроглии и системы нейрон—нейроглия еще малочисленны. Представления о химизме глии зачастую базируются на косвенных данных результатах биохимического анализа серого и белого вещества мозга, культуры тканей, глиальных опухолей мозга. Малочисленны и прямые данные, полученные как микробиохими-ческими методами на одиночных изолированных клетках или на клеточных фракциях, обогащенных глиальными элементами, так и цитохимическими методами. Канчдый из перечисленных методов исследования имеет свои недостатки, но данные, полученные при их использовании, показывают, что нейроглия представляет собою метаболически активную популяцию клеток мозга с определенными особенностями обмена веществ. Недостаточность накопленного материала не позволяет пока установить, всем ли нейрогли-альным клеткам свойственны одни и те же черты химизма, или последний имеет свою специфику в разных типах клеток и в разных образованиях мозга. [c.127]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология