ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Отщепление пептида от полимера-носителя из "Твердофазный синтез пептидов" Полимер-носитель трижды промывают трифторуксусной кислотой (каждый раз берут по 10 мл СРзСООН на 1 г полимера), следя за тем, чтобы трифторуксусная кислота при каждой промывке пропитывала и экстрагировала полимер в течение 1 мин, затем раствор пептида упаривают досуха при пониженном давлении без нагревания. Пептид несколько раз растворяют в подходящем растворителе, например в смеси уксусная кислота — вода (3 1) или метанол— вода (1 1), и упаривают растворитель при пониженном давлении для удаления избытка бромистого водорода (пептид на этой стадии всегда обнаруживает кислую реакцию). Если в раствор для отщепления пептида был добавлен анизол, неочищенный продукт тщательно экстрагируют эфиром (для удаления анизола, метионина и метилэтилсульфида можно использовать также хроматографию на сефадексе), а затем сушат пептид в высоком вакууме. Неочищенный пептид после отщепления раствором бромистого водорода в трифторуксусной кислоте всегда содержит много нримесей непептидного характера, поэтому вес вещества на этой стадии не является действительным показателем выхода. Выход неочищенного пептида можно определить лишь после аминокислотного анализа гидролизата. [c.95] Внимание Весь процесс отщепления пептида от полимерного носителя необходимо проводить в хорошо вентилируемом вытяжном шкафу. Трифторуксусная кислота вызывает серьезные ожоги, поэтому необходимо принимать все меры предосторожности, чтобы исключить попадание ее на кожу. Следует остерегаться вдыхать пары СРзСООН. [c.95] Схема прибора для работы с фтористым водородом. [c.96] Самые распространенные случаи ожогов фтористым водородом обусловлены случайными контактами с этим веществом, после которых НР, например, не полностью вымывают из-под ногтей через несколько часов это приводит к появлению болезненных ожогов. Боль можно облегчить применением глюконата кальция. В случае попадания фтористого водорода на кожу пораженное место следует обильно промыть водой, подержать некоторое время в воде, а затем нанести раствор глюконата кальция. [c.96] Всю работу с фтористым водородом необходимо проводить в хорошо вентилируемом вытяжном шкафу вдыхание фтористого водорода смертельно. [c.96] И Промежуточные сосуды-резервуары изготовлены из прозрачной пластмассы Ке1-Р . [c.98] Установка, схематически изображенная на рис. 20, имеется в продаже. [c.98] Имея в распоряжении необходимые материалы, установку, показанную на рис. 21, можно собрать в течение 2 дней. Клапаны и соединения изготавливаются из тефлона, а остальные части установки выполняются из пластмассы Ке1-Р. Для соединения сосудов с трубками удобно использовать фланцевые зажимы. Для уплотнения этих соединений применяют кольца из специальной резины, которые периодически необходимо менять. [c.98] Установку для работы с фтористым водородом можно также собрать из полиэтиленовых трубок и кранов, полипропиленовых тройников и сосудов с завинчивающимися крышками [97]. Однако при охлаждении полиэтиленовые трубки сильно сжимаются и в крышках сосудов остаются незакрытые отверстия для уплотнения можно использовать ленту из тефлона. Общая стоимость подобных установок намного меньше стоимости аппаратуры, описанной выше, но при работе с ними необходимо особенно внимательно следить за тем, чтобы не было утечки фтористого водорода или падения вакуума. В этих установках наряду с опасностью утечки весьма токсичного фтористого водорода существует также опасность попадания в прибор водяных паров. В случае применения подобных установок для удаления фтористого водорода вместо вакуума обычно используют ток сухого азота. [c.98] Типичный эксперимент проводится следующим образом. [c.99] Химизм процесса. Относительно механизма этих реакций имеются лишь чисто умозрительные представления, а реальный механизм действия фтористого водорода фактически неизвестен. Однако некоторые данные представляют интерес. [c.102] Отщепление аммиаком [14, 128]. Безводный метанол насыщают при 0° сухим аммиаком, загружают пептидил-полимер (10 мл раствора на 1 г полимера), помещают в колбу магнитный перемешивающий стержень, колбу плотно закрывают и перемеши-Бают суспензию на магнитной мешалке в течение 2 дней при комнатной температуре. Затем колбу открывают, полимер-носитель отфильтровывают, промывают его метанолом, объединенные фильтрат и промывную жидкость упаривают в вакууме. В случае пептидов, не растворимых в метаноле, применяют другой подходящий растворитель. [c.103] Для некоторых пептидов можно получить более высокие выходы. Для этого суспендируют соответствующие пептидил-полимеры в очищенном диоксане, охлаждают суспензию и затем прибавляют к ней равный объем холодного метанола, насыщенного аммиаком колбу закрывают и перемешивают смесь, как указано выше [128]. Используют также смеси насыщенного аммиаком метанола и диметилформамида [44], Если отщепление пептида от полимера-носителя посредством аммонолиза проходит неудовлетворительно, то вначале можно отделить пептид от полимера переэтерификацией в виде метилового эфира, а затем последний превратить в амид в растворе. [c.103] Отщепление гидразином [93]. Пептидил-полимер суспендируют в очищенном диметилформамиде Ъмл ДМФА на 1 г полимера) и добавляют к суспензии безводный гидразин (30 экв на 1 экв пептида). Смесь перемешивают в течение 2 дней при комнатной температуре. Полимер-носитель отфильтровывают и промывают диметилформамидом. Объединенные фильтрат и промывные жидкости упаривают в вакууме, а гидразид пептида очищают подходящим методом. [c.103] Безводный гидразин из гидразингидрата можно получить методом Хонда с сотр. [37]. К слегка кипящей смеси 2 л толуола и 2 кг окиси кальция добавляют из капельной воронки 1 кг гидразингидрата в течение 3 час. Смесь кипятят еще 10 час и затем отгоняют безводный гидразин в приборе Дина — Старка. Гидразин, отделяющийся в виде нижнего слоя, удаляют, а толуол вновь возвращают в перегонную колбу. Выход, достигающий 75%, можно повысить путем многократного повторного использования толуола. [c.104] Отщепление путем переэтерификации [56]. Метиловые эфиры. Пептидил-полимер суспендируют в безводном метаноле (40 мл метанола на 1 г полимера) и добавляют к суспензии триэтиламин (50 молей на 1 моль пептида). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 час. Полимер-носитель отфильтровывают, растворитель упариваюг и полученный метиловый эфир пептида очищают подходящим способом. [c.104] Этиловые эфиры. Суспензию пептидил-полимера в 10%-ном растворе триэтиламина в спирте перемешивают при 45° в течение 90 час. С помощью аналогичной реакции в течение 40 час при 80° был получен бензиловый эфир пептида с прекрасным выходом. Аналогично можно использовать другие первичные спирты. Гальперн обнаружил, что реакция переэтерификации подавляется при использовании тщательно высушенных реагентов. [c.104] Вернуться к основной статье