ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Р Хроматография на бумаге и тонкослойная хроматография из "Твердофазный синтез пептидов" Хроматография на бумаге [123]. Хроматография на бумаге хотя не позволяет проводить такие быстрые определения, как метод тонкослойной хроматографии. [c.134] Тонкослойная хроматография [49, 96, 126]. Тонкослойная хроматография (ТСХ) удобна для оценки чистоты как исходных веществ при твердофазном синтезе, так и синтезированных пептидов. При ТСХ для нанесения на пластинку можно использовать силикагель О или силикагель Н оба сорбента дают примерно одинаковые величины В продаже имеются подготовленные для нанесения тонкого слоя стеклянные пластинки, листы пластика с нанесенным тонким слоем силикагеля, листы пластика или стеклянные пластинки с нанесенным тонким слоем порошкообразной целлюлозы, а также другие носители и оборудование для ТСХ. [c.137] Пластиковые листы помещают на стеклянные пластинки, чтобы удерживать их во время прохождения растворителя в нужном положении. Пластиковые листы имеют то преимущество, что после хроматографирования их можно разрезать, благодаря чему можно легко использовать несколько проявляющих реагентов. Для хроматографии одного или двух пятен пластиковый лист можно разрезать на узкие полоски и вести хроматографирование в больших пробирках. [c.137] Системы растворителей, применяемых для тонкослойной хроматографии производных аминокислот и пептидов, приведены в табл. 6. Для обеспечения воспроизводимости значений необходимо следить за тем, чтобы атмосфера в проявляющих камерах была насыщена парами растворителей. Для этого к стенкам камеры прикрепляют листы фильтровальной бумаги, смоченные растворителем. На хроматограммы вместе с неизвестными веществами необходимо, если это возможно, наносить вещества-свидетели. [c.137] Сравнительная подвижность и значение / / производных аминокислот при ТСХ в некоторых системах растворителей приведены в табл. 7. Эти значения получены при нанесении примерно 1 мкл раствора аминокислотного производного (от 10 до 50 мг на 1 мл хлористого метилена или этилацетата). Чистоту БОК-аминокислот определяют путем опрыскивания хроматограмм нингидрином до и после удаления защитной БОК-группы под действием паров соляной кислоты (см. стр. 143). Для идентификации некоторых других групп в ряде производных можно также применять реактив с иодидом калия и другие проявляющие реактивы ( см. стр. 142—146). Примерные значения Rf для некоторых производных аминокислот в различных системах растворителей приведены в табл. 8. Правильные результаты получаются при условии нанесения на хроматограмму небольших количеств производных при нанесении же на хроматограмму большого количества вещества значение -/ / искажается, но зато более четко выявляются примеси. [c.139] ТСХ пептидов. Хорошие результаты были получены на пластиковых листах и стеклянных пластинках, покрытых тонким слоем порошкообразной целлюлозы, а также на пластинках и пластиковых листах с тонким слоем силикагеля. По сравнению с хроматографией на бумаге продолжительность процесса тонкослойной хроматографии весьма невелика (от 1 до 2 час), образующиеся пятна имеют четкие границы и небольшой размер, что обеспечивает высокое разрешение и чувствительность. Для ТСХ на порошкообразной целлюлозе можно использовать те же системы растворителей, что и для хроматографии на бумаге. Некоторые системы растворителей, рекомендуемые для этого вида ТСХ пептидов, а также для ТСХ на силикагеле, приведены в табл. 6. Системы С, Т, У и Ф предложены Нитецкнм. Систему С применяют для малоподвижных соединений система Т — наилучшая из всех систем и очень удобна для получения двумерных хроматограмм. Она примерно в 3 раза более устойчива, чем системы, содержащие бутанол-1. Система У — очень устойчивая полярная система, она пригодна только для ТСХ (не для хроматографии на бумаге). Система Ф обеспечивает ту же величину подвижности, что и система К, но дает лучшее разрешение и очень удобна для разделения диастереоизомеров. Для нейтральных незащищенных пептидов подвижности в этих системах (относительно обычно используемой системы К) таковы [91] С Т У К = Ф. Для очень кислых пептидов их относительные подвижности на бумаге и при ТСХ на силикагеле различны на бумаге Т С К = Ф У, на силикагеле С Т У = К. [c.140] Вернуться к основной статье