ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Обмен медиаторов из "Переживающий срез мозга как объект нейрофизиологического и нейрохимического исследования" Поглощение, высвобождение и синтез медиаторов имеют боль-, шое физиологическое значение, так как связаны с передачей нервного импульса. Техника изучения метаболизма медиаторов очень сходна с изучением ами 50кислот. [c.82] Расчет количества ГАМК, скорости ее поглощения, кинетических констант проводится, как и для любых аминокислот (с. 75, 77). Величина поглощения выражается как отношение ткань/ среда, а скорость входа измеряется в мкмоль г мин . Величина поглощения зависит от концентрации ГАМК в инкубационной среде, от времени инкубации и различается в разных областях мозга (табл. 9). В табл. 10 приведены константы скоростей поданным разных авторов. Большой разброс данных, представленных в табл. 10, может быть обусловлен недостаточной стандартизацией условий эксперимента. [c.83] Моноамины. Следующую группу медиаторов представляют моноамины. Это дофамин, норадреналин, серотонин. Работа с этими медиаторами проводится по обычной схеме (с. 71). [c.85] Так же как и в случае аминокислот, поглощение медиаторов выражается в виде отнощения концентраций моноаминов в ткани и среде. Ниже приведены величины поглощения моноаминов срезами разных областей мозга (табл. 11) и характер их зависимости от времени инкубации (рис. 37). [c.85] Для определения кинетических параметров поглощения срезы инкубируют в средах с концентрацией медиаторов от 0.5 до 20 10 Ми определяют скорость поглощения в зависимости от концентрации медиатора в среде. Ход эксперимента и расчеты такие же, как для аминокислот (с. 77). [c.85] Для изучения процесса высвобождения моноаминов из срезов мозга первоначально проводят их преинкубацию с изотопом для насыщения срезов Н- или С-моноамином (с. 72). Как при изучении любых медиатооов, следует строго соблюдать постоянство концентраций К и Са в среде, так как при их увеличении наблюдается увеличение выброса медиаторов. [c.86] По окончании преинкубации (15—30 мин) срезы ополаскивают нерадиоактивной средой (10—15 с) и переносят в перфузионную камеру. Пробу перфузата отбирают через определенные промежутки времени. Определяют радиоактивность перфузата и остаточную радиоактивность среза (с. 81). [c.86] Можно проводить определение высвобождения и без перфузионной камеры, с помощью второго методического приема, описанного для аминокислот (с. 80). В этом случае срез notne преинкубации переносят в свежую среду, не содержащую радиоактивных моноаминов. Инкубация без изотопа продолжается стандартное время, затем определяют радиоактивность среды и среза, как в случае с поглощением (Шаляпина и др., 1978). [c.86] Для определения динамики выхода медиатора во время инкубации без изотопа срез через определенные интервалы времени с помощью специального 1,/ держателя переносят в новый сосуд со средой (Тазалакян и др., 1980). [c.87] Результаты по высвобождению моноаминов могут быть выражены в процентах высвободившегося моноамина от исходного уровня, как отношение среда/ткань (М/5), как постоянная скорости (нг мг мин ). [c.87] Ацетилхолин. АХ резко отличается по характеру метаболизма от моноаминов и ГАМК- Он обладает очень быстрой скоростью обмена. Появившийся в ткани свободный АХ (высвободившийся в результате нервного импульса или введенный извне) очень быстро разрушается ферментом — ацетилхолинэстеразой (3.1.1.7), Накопление АХ в клетке осуществляется путем синтеза его из предшественников, поступающих извне. Для АХ не имеют большого значения процессы реабсорбции и обратного всасывания, а более важны поглощение предшественников и его синтез внутри клетки. [c.87] Время инкубации с радиоактивными предшественниками (концентрация 10—200 мМ) составляет 0.5—3 ч. Следует тш,ательно соблюдать постоянство концентраций и Са , так как увеличение концентраций этих ионов вызывает выброс медиатора из срезов. Кроме того, во избежание распада вновь синтезированного АХ в среду инкубации следует добавлять ингибиторы АХЭ. В качестве ингибиторов могут быть использованы эзерин, зарин, зоман, параоксон (табл. 13). [c.88] При расчете количества АХ следует учитывать, что для равномерно меченой глюкозы берется только 1/3 ее УР, так как только 2 из б меченых атомов идет на формирование ацетильной группы АХ. Для 1- С-глюкозы и б- С-глюкозы УР делят пополам, так как из двух образующихся триоз лишь одна, меченая, идет на синтез АХ. Принимается, что радиоактивные субстраты не разбавляются нерадиоактивными тканевыми субстратами. Для этого существуют следующие основания 1) сравнение количества АХ, синтезированного из С-предшественников, с количеством, определенным другими методами, дает сходные результаты 2) включение ацетильной и холиновой группы в АХ примерно эквивалентно (Browning, S hulman, 1968). Для определения скорости синтеза измеренное количество АХ необходимо разделить на время инкубации с радиоактивным предшественником (нмоль г мин ). [c.89] Вернуться к основной статье