ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Методы исследования фермент-субстратных комплексов из "Структура и механизм действия ферментов" Отправным пунктом в первых опытах по определению структуры фермент-субстратного комплекса, в котором субстрат связан продуктивно, была структура стабильных комплексов между ферментом и ингибитором. Классическим примером такого рода является установление структуры лизоцима (см. конец данной главы). Указанный подход можно реализовать несколькими способами. Например, можно связать определенную часть молекулы субстрата с ферментом и установить структуру остальной части путем построения модели. Другой способ состоит в использовании не способного к ферментативному превращению аналога субстрата, в котором модифицирована реакционноспособная связь. Показательным примером применения подобного подхода может служить связывание рибонуклеазой фосфоната вместо фосфата (гл. 12, разд. В). [c.36] Иногда удается прямо исследовать реакционноспособный фермент-субстратный комплекс в условиях, при которых ферментативная реакция не протекает. Эти прием и основаны на использовании медленно реагирующих субстратов при pH, когда фермент почти полностью инактивирован в результате перехода остатка каталитического центра в другое ионное состояние (см. индолилакрилоилхимотрипсин), или при очень низких температурах (ацильное производное эластазы см. ниже), либо на использовании химически модифицированного фермента. Примером химической модификации является восстановление карбоксильной группы важного в каталитическом отношении остатка Азр-52 лизоцима до спиртовой группы (см. ниже и гл. 12, разд. Д). [c.36] Этот подход был использован также в опытах с применением ЯМР-спектроскопии [46]. [c.37] Другим примером является связывание диоксиацетонфосфа-та триозофосфатизомеразой (гл. 12, разд. Ж.1). Этот фермент катализирует изомеризацию одного реагента в другой устанавливающееся равновесие сдвинуто в сторону образования одной из форм. Напомним, что для обратной реакции комплекс фермент—продукт является фермент-субстратным комплексом. [c.37] Примеры применения всех этих подходов обсуждаются в гл. 12. Ниже несколько более подробно рассмотрены сериновые протеазы и лизоцим. Эти ферменты сыграли важную роль в развитии обсуждаемых здесь идей и методов и часто упоминаются в данной книге. [c.37] Вернуться к основной статье