ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Полимеразная цепная реакция из "Генетическая инженерия" В то же время небольшая фракция мутантных последовательностей не влияет на результат таких аналитических процедур, как прямое секвенирование и гибридизация на фильтрах со специфичными олигонуклеотидными пробами. Ошибки, возникшие на этапе клонирования и секвенирования индивидуальных амплифи-цированных in vitro фрагментов, легко выявляются анализом нескольких независимых клонов гибридных ДНК и установлением исходной, наиболее часто встречающейся последовательности нуклеотидов. Если ошибка была введена на начальной стадии амплификации сегмента ДНК, то мутантная форма может составлять большую долю полученного препарата. В этом случае для достижения достоверного результата и выявления гибридной ДНК, содержащей природн)то последовательность, необходимо осуществлять либо прямое секвенирование независимо амплифицированных проб ДНК, либо анализ ряда клонов гибридных молекул ДНК, полученных после независимых ПЦР. [c.50] В процессе развития работ с использованием ПЦР возникла идея амплифицировать в одной пробирке сразу несколько различных генетических локусов. В этом случае одновременно используют более одной пары олигонуклеотид-ных праймеров. Такая реакция получила название мультиплексная ПЦР (МПЦР). [c.50] Данный подход позволяет существенно экономить время и усилия при выполнении анализов. Особенно широко его стали применять для экспресс-идентификации инфекционных агентов. Например, С. Н. Щелкунов с сотрудниками разработали метод МПЦР, позволяющий при использовании пяти пар праймеров проводить одновременно родо- и видоспецифичную идентификацию ортопоксвирусов, патогенных для человека (рис. 1.31). С помощью мультиплексной ПЦР можно также осуществлять одновременную детекцию множественных инфекционных агентов, обусловливающих схожие клинические проявления. [c.50] ОТ-ПЦР применяют для идентификации РНК-содержащих вирусов. В этом случае используют так называемые генспецифичные праймеры, которые обеспечивают высокую надежность проводимых анализов. [c.51] Вернуться к основной статье