ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Ретровирусы из "Генетическая инженерия" При создании трансгенных животных используют также плюрипотентные эмбриональные стволовые клетки (ES-клетки), взятые из бластоцисты. ES-клетки можно культивировать in vitro и после необходимых манипуляций вернуть в организм, инъецируя их в бластоцисту. [c.450] Клетки колонизируют эмбрион и участвуют в его нормальном развитии, давая начало клеткам всех типов соматических тканей и нередко клеткам зародышевого пути. Прежде чем инъецировать ES-клетки в бластоцисту, в них вводят целевые трансгены — либо путем трансфекции, либо инфицируя их рекомбинантными ретровирусами. Практическое достоинство этой методической схемы состоит в том, что она дает возможность проводить селекцию трансформированных ES-клеток по определенному параметру. Это может быть число копий трансгена, его хромосомная локализация или характер экспрессии. Все получаемые по такой схеме первичные трансгенные животные — мозаичные организмы, которые состоят из содержащих и не содержащих трансген клеток поэтому для получения чистых трансгенных линий необходима селекционная работа. Между тем довольно часто ES-клетки оказываются не способными колонизировать зародышевые ткани, что, по всей вероятности, объясняется накоплением хромосомных нарушений в процессе культивирования и селекции in vitro. [c.450] Проблему мозаичности первичных трансгенных животных можно преодолеть, если использовать трансформированные и прошедшие селекцию ES-клетки в качестве доноров ядер (см. рис. 18.1). Ядра ES-клеток, несущие трансгены, способны колонизировать энуклеирован-ные ооциты, которые затем продолжают свое нормальное развитие. В результате может получиться животное, в каждой клетке которого будет содержаться трансген. [c.450] В результате использования данной схемы часто формируется организм, мозаичный по числу и локализации вирусных встроек в клетках. Поэтому для получения чистых линий, пригодных для исследования экспрессии введенных генов, необходим масштабный бридинг. [c.450] Вернуться к основной статье