Горовица и Берка метод

Рис. 2.1. Конструирование рекомбинантов по методу Иш-Горовица и Берка [10]. с — сайт клонирования, х и у — другие уникальные рестрикционные сайты. Космиды расщепляют один препарат по сайту х, другой по сайту у и обрабатывают фосфатазой. Затем каждый препарат разрезают по сайту с. Нужные плечи — те, которые несут со5-сайты в правильной (показано маленькой стрелкой) ориентации. Желательно, хстя и необязательно, индивидуально выделять необходимые фрагменты до лигирования. Методика построена так, чтобы исключить образование мультимеров космид, которые могли бы эффективно вовлекаться в упаковку.

Выбор ферментов, используемых для двойного расщепления космидного вектора при приготовлении плеч по методу Иш-Горовица и Берка [10], определяется характеристиками данной космиды. На рис. 2.1 приведена схема общего метода для любого космидного вектора. Методика, детально описанная в табл. 2.2, касается семейства космид Лориста [7, 8], где фермент X — это Sstl, фермент Y — BsffiH, а сайт клонирования Я1Пс1П1. [c.47]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология