Денхардта раствор

Стократный раствор Денхардта (2%-ный БСА 2%-ный фиколл 400, 2%-ный поливинилпирролидон). На 100 мл [c.328]

Фильтры помещают в ЗФР (Na l, забуференный фосфатом), содержащий 10X раствор Денхардта, и инкубируют I ч при комнатной температуре, периодически встряхивая. [c.70]

Положите фильтр с иммобилизованной ДНК на поверхность раствора для гибридизации (бхЗЗС раствор, Денхардт х I, 25мкг/мл суммарной ШК из дрожжей). После полного намо-кшия фильтр утопите. Меченный зонд добавляйте при Т , гибридизационного раствора. Гибридизацию проводите в течение 30-40 мин. [c.36]

Для гибридизации ДНК/ДНК, когда как связанная, так и гибридизированная нуклеиновые кислоты является одноните-выми ДНК, необходимо предварительно обработать мембрану, чтобы блокировать центры неспецифического связывания ДНК на нитроцеллюлозе. С этой целью Денхардт [61] успешно использовал 0,02 %-ные растворы фикола, поливинилпирролидона и бычьего сывороточного альбумина. [c.320]

В случае использования мембран большого размера гибриг-дизация проводится аналогично описанной выше в этом разделе, но с некоторыми изменениями. Если в качестве радиоактивного зонда применяется ДНК, то, чтобы избежать неспецифического связывания, мембрану необходимо предварительна обработать реактивом Денхардта. Реакция гибридизации пра-водится в пластмассовых пакетах, которые можно запечатать при нагревании (пакеты для пищевых продуктов). При работе с мембраной размером 12x17 см достаточно 15 мл содержащего радиоактивный зонд раствора для гибридизации . Пакет запечатывают со всех четырех сторон так, чтобы воЗ -душных пузырьков было по возможности меньше, и затем-погружают в водяную баню при температуре, подходящей для-радиоактивного зонда. На поверхности мембраны не должно быть никаких пузырьков воздуха. После гибридизации и про - [c.323]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология