Универсальные методы введения плазмид

Универсальные методы введения плазмид [c.238]

Чтобы избавиться от такой многоступенчатости, в той же лаборатории разработали иной подход к получению и селекции рекомбинантных вирусов осповакцины, который оказался очень удобным и универсальным для введения инсерций, делеций или мутаций в любую область вирусного генома. В данном случае доминантный маркер gpt находится в гибридной плазмиде вне фрагмента вирусной ДНК, и поэтому он может включиться в вирусный геном только в результате одиночного кроссинговера (рис. 14.33), при котором интегрируется вся гибридная плазмида, а не только вирусный сегмент. (Интеграция из плазмиды чистого вирусного фрагмента является результатом двойного кроссинговера.) Структура генома рекомбинантного вируса, в который встроена вся плазмида, нестабильна из-за наличия протяженных тандемных повторов (например tk или tku см. рис. 14.33), и при снятии селективного давления по гену gpt в результате внутримолекулярной рекомбинации плазмидная часть с геном gpt исключается с высокой эффективностью, а чужеродный целевой ген или вводимое мутационное изменение сохраняется в составе стабильного варианта VA . Этот метод получил название временной доминантной селекции. Используя данный метод, в лаборатории [c.394]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология