Загрузка геля. Ширина белковых зон

Очевидно, что разделение близко идущих зон белков будет тем успешнее, чем уже сами эти зоны, поэтому при электрофорезе следует заботиться о максимальном сужении белковых зон (полос). Это накладывает ограничения на допустимую загрузку геля. Разумеется, строгость таких ограничений зависит от состава белковой смеси и характера разделения полос. В качестве ориентировочного максимума можно принять загрузку порядка 1 мг суммарного препарата белка на 1 см сечения геля. Для кармана шириной 5 мм в пластине толщиной 1,5 мм это соответствует примерно 75 мкг белка, а для трубки диаметром 6 мм — до 200 мкг. Идентификацию полос белка по их окраске можно проводить при загрузках, в 10 раз меньших. При перегрузке белковые полосы бывают резкими в передней своей части и размытыми сзади. При этом следует всегда считаться с возможностью преципитации белка в момент вступления его в гель, когда все макромолекулы стягиваются в узкую полоску и локальная концентрация их сильно увеличивается. [c.44]

Для подбора оптимального объема препарата филь- тровальную бумагу можно вырезать в форме клина и наложить ее на гель так, чтобы сужение было перпендикулярно к направлению поля. Тогда каждая белковая полоса после фракционирования будет, иметь интенсивность, меняющуюся вдоль ее длины, и можно будет выбрать оптимальную ширину фильтровальной бумаги для препарата, т. е. оптимальную загрузку геля. Для точной дозировки исходного количества белка на гель можно положить полоску сухой фильтровальной бумаги, а потом пипеткой нанести иа нее определенный объем раствора препарата (рис. 10). [c.30]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология