Плазмидные ДНК Плазмидные ДНК, центрифугирование в градиенте плотности

Ген протоксина В. thuringiensis subsp. kurstaki находится на одной из семи плазмид длиной 2,0 7,4 7,8 8,2 14,4 45 и 71 т. п. н. Чтобы определить, в какой именно, проводили центрифугирование плазмидной ДНК в градиенте плотности сахарозы. Были вьщелены три фракции, в кото- [c.335]

Для идентификации гена, кодирующего протоксин, используют обычную методику. В. thuringiensis выращивают в культуре и лизируют клетки. Выделяют суммарную клеточную ДНК и центрифугируют ее в градиенте плотности s l, чтобы разделить плазмидную и хромосомную ДНК. Если гены протоксинов входят в состав генома, создают банк клонов хромосомной ДНК. Если же они содержатся в плазмиде, то плазмидную ДНК фракционируют по размерам центрифугированием в градиенте плотности сахарозы. Это обогащает ту плазмидную фракцию, которая послужит в дальнейшем исходным материалом для идентификации генов протоксинов (рис. 15.3). [c.335]

Метод лизирования клеток с последующим центрифугированием в градиенте плотности можно использовать для выяснения вопроса о том, содержит ли данный бактериальный штамм плазмидную ДНК. Правда, данный метод требует дорогостоящего оборудования и больших затрат времени, к тому же с его помощью можно проверить одновременно лишь относительно небольшое число культур. Однако это лучший метод очистки плазмидных ДНК в количествах, достаточных для дальнейшего анализа. [c.149]

Рис. 1.9. Формирование зон плазмидной и хромосомной ДНК в градиенте плотности s l. В УФ свете сфотографирована центрифужная пробирка, в которой произошло разделение плазмидной и хромосомной ДНК после центрифугирования прн 55 000 об/мнн в течение 22 ч.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология